细菌的生长曲线_范文大全

细菌的生长曲线

【范文精选】细菌的生长曲线

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【专家解析】细菌的生长曲线

【优秀范文】细菌的生长曲线

范文一:细菌生长曲线- 投稿:袁鰁鰂

实 验 报 告

课程名称:生物工艺学实验 实验名称:大肠杆菌生长曲线测定 专 业:___生物工程__________ 学 姓 号:________ 名:____________

实验地点:_________________ 实验日期:_________________

[实验目的和要求]

1.了解光电比浊计数法的原理。 2.了解细菌生长曲线的特点,绘制生长曲线。 3. 掌握光电比浊计数法测定大肠杆菌生长曲线的方法。

[实验器材]

1.菌种 大肠埃希菌(E.coli)1~18h 液体培养物或菌悬液。或者上 次实验诱变得到的菌种。 2.培养基 营养肉汤培养基,生理盐水 3.其它:721 型光电比色计、1ml 无菌移液管、摇床等。

[实验原理和方法]

原理: 细菌的生长一般指群体的生长, 常常具有一定的规律性。 描述细菌在液体培养基中的生长规律的曲线叫做生长曲线,即将一 定量的细菌接种到一定容积的液体培养基中,在适宜的条件下进行 培养,以培养时间为横坐标,以菌数的对数为纵坐标进行作图得到 的曲线。 典型的生长曲线可分为延迟期、对数生长期、稳定期和衰亡期 四个时期。 细菌培养物在生长过程中,由于原生质含量的增加,会引起培 养物混浊度的增高。细菌悬液的混浊度和透光度成反比、与光密度 成正比,透光度或光密度可借助光电比浊计精确测出,因此可用光 电比浊计测定细胞悬液的光密度(OD 值),表示该菌在特定实验 条件下的细菌相对数目,进而反映出其相对生长量。

步骤: 1.接种、培养 采用无菌操作技术用移液管向每个 100ml 营养肉汤培养基的三角瓶 中试管准确加入大肠埃希菌悬液 3ml,轻轻振荡混匀,另设一空白 对照组(不加大肠埃希菌悬液)。 将接种后的 9 组三角瓶置于摇床上,37℃,220r/min,振荡培养。间 隔一定时间,即 0、1、2、3、4、5、6、7、8、9~18 小时后,从摇 床上将取下其中一瓶三角瓶培养物(标记时间),置 4℃冰箱保存。 2.吸光度测定 每组取 9 支干净小试管,从不同时间培养菌液中摇匀各取 3ml,将 大肠埃希菌培养液进行适当稀释,使光密度在 0.1~0.65 之间,以没 有接种的空白对照组液体培养基调零点,在 600nm 波长,1cm 比色 杯中依次进行测定 OD 值。测定从最稀浓度的菌悬液开始,依次测 定。 经稀释后测定的 OD 值要乘以稀释倍数, 才是培养液的实际 OD 值。 3.绘制生长曲线 以光密度(OD 值)为纵坐标,培养时间为横坐标,绘制大肠埃希菌的 生长曲线。

[实验数据和结果]

时间 19 日 16:30 18:30 20:20 8:50 10:10 12:10 13:22 15:30 16:30 17:50 19:30 培养时长 0 2 5.67 16.17 17.5 19.5 20.7 22.83 23.83 25.16 26.83

OD 值 /

20 日

-0.08 -0.135 0.188 0.204 0.243 0.281 0.369 0.45 0.454 0.42

讨论:本次实验结果并不理想,主要有以

下几个方面: 1、由于空白对照有可能被污染,含有大量杂菌,在以此为标准进 行调零后测得的 OD 值有几个是负值。 2、由于实验实在下午开始,在前 16 小时仅取了两次样,前半部分 曲线缺乏足够数据

3、OD 值的测量分为两批,使用了两台不同的分光光度计,其中上 午使用的仪器有一定问题,前 4 个数据可能有较大误差 4、最后一瓶培养液中发现有大量白色物质,现状类似于鸡蛋汤汤 中的蛋花,可能是混入了杂菌,此组数据不可靠,因此特意留做最 后一组,以减少对实验影响。

评语及成绩:

教师

(签署)

范文二:细菌生长曲线 投稿:魏桸桹

实验九 测定细菌生长曲线

[实验目的] 1.了解细菌生长曲线特征:2.学习液体培养基的配制以及注意事项。3.学习液体种子和固体种子的不同接种方法和注意事项。4.利用细菌悬液浑浊度间接测定细菌生长。

[仪器和材料]

1.实验材料

(1)大肠杆曲,枯草杆曲培养液及大肠杆菌平板。

(2)牛肉膏蛋门胨葡萄糖培养基(150ml/250ml 三角瓶X 4瓶/大组),配方:牛肉膏5g,蛋白胨10g,NaCl 5g,葡萄糖10g,加水至1000ml,pH7.5。

2.实验仪器

取液器(5000μl,1000μl,200tμl 各一支); 培养箱.摇床,722s分光光度汁; 1000μl 无菌吸头100个;5000μl 无菌吸头2个;1ml或4ml玻璃或塑料比色皿4个,共用参比杯一个。

[实验原理]

将一定量的细菌接种在液体培养基内.在一定的条件下培养,可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性,如以细菌活菌数的对数作纵坐标,以培养时间作横坐标,可绘成一条曲线,称为生长曲线(图9 1)。

单细胞微生物发酵具有4个阶段,即调整(迟滞期)、对数期(生长旺盛期)、平衡期(稳定期)、死亡期(衰亡期)。

生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程动态。不同微生物有不同的生长曲线,同一种微生物在不同的培养条件下,其生长曲线也不一样。因此,测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的.

测定微生物生长曲线的方法很多,有血细胞计数法,平板菌落计数法,称重法和比浊法等。本实验采用比浊法测定,由于细菌悬液的浓度与浑浊度成正比,因此,可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。将所测得的光密度值(测OD550或 OD620或OD600或OD420,可任选一波长)与对应的培养时间作图,即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。注意,由于光密度表示的是培养液中的总菌数,包括活菌与死菌,因此所测生长曲线的衰亡期不明显。

从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间,即代时,以G表示。其计算公式为;

G=(t2-t1)/[(1gW1—lgW2)/lg2]

式中tl和t2为所取对数期两点的时间;w1和w2分别为相应时间测得的细胞含量(g/L)或 OD。

[实验步骤]

1.准备菌种:将大肠杆菌,枯草杆菌分别接种到装有牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基的三角瓶中,37℃,200r/min振荡培养14-18h.另外准备大肠杆菌单菌落平板l块(37'C培养24h)。

2.接种:分别将1.5ml(1%接种量)和4-5ml(3%接种量)大肠杆菌菌液和一个大肠杆菌单菌落接人含150ml培养液的三角瓶中.37℃,200r/min振荡培养;把4.5ml枯草杆菌(3%接种量)接入含150ml培养液的三角瓶中,37℃,200r/min振荡培养。

3.测量;每培养1h取样一次.净培养(不包括取样时间)10h结束培养,测量培养液pH值。零小时也要测。

如果选用4ml比色皿取500μl培养液到2000μl蒸馏水中(稀释5倍),以蒸馏水为对照,测OD650。或OD620或OD600或OD420任选一波长),如果选用lml比色皿,可以取1000μl培养液,以蒸馏水为对照,直接测OD620 、OD600或OD420(任选一波长),当OD值大于0.6时,下一样品要稀释1倍测量.

[实验结果].

B.subtilis3% 61.72; E.coli(plate) 35.61 。②液体种子比较均匀,用相同的液体培养基转接后条件变化小,因此迟缓期几乎没有出现;实验结果代时长于理论值,主要是实验条件的影响,培养基、接种量、培养容器、温度条件等均影响到理论值。

E.coli/B.subtilis生长曲线比较 1.8 1.6 1.4 1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.20

1234567891011 时间(h)

[试验讨论]

(1)全班同时取样,

时间以教室挂钟为准,取样时间越短越好,要求在10~15min内完成),同时开始振荡,取样期间假定细菌暂停生长.取样时间从发酵总时间中扣除.

(2)为减少误差,须固定参比杯,不要旋动波长旋钮;每组固定同一台分光光度计,固定同一取液器 OD(600nm)

范文三:测定细菌生长曲线 投稿:陶粌粍

实验七 测定细菌生长曲线

一、

实验目的

1. 了解细菌生长曲线特征,测定细菌繁殖的代时; 2. 学习液体培养基的配制以及接种方法; 3. 反复练习无菌操作技术;

4. 了解不同细菌,不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同; 5. 掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法

二、 实验原理

将一定量的细菌接种在液体培养基内,在一定条件下培养,可观察到细菌的生长繁殖有一定的规律性,如以细菌的活菌数的对数作纵坐标,以培养时间作横坐标,可绘成一条曲线,成为生长曲线(如图一)。

图一 微生物生长曲线示意图

单细胞微生物的发酵具有四个阶段,即Ⅰ调整期(延滞期)、Ⅱ对数期(生长旺盛期)、Ⅲ平衡期(稳定期)、Ⅳ死亡期(衰亡期)。

生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程的动态。不同的微生物有不同的生长曲线,同一种微生物在不同的培养条件下,其生长曲线也不一样。因此,测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。

测定微生物生长曲线的方法很多,有血球计数板法、平板菌落计数法、称重法和比浊法等。本实验采用比浊法测定,由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比,因此,可利用分光光度计测定细菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。将所测得的光密度值(OD600)与其对应的培养时间作图,即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。注意,由于光密度表示的是培养液中的总菌数,包括活菌与死菌,因此所测定的生长曲线的衰亡期不明显。

从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间,即代时,以G表示。其计算公式为:

t2t1

G

(lgW2lgW1)/lg2

式中t1和t2为所取对数期两点的时间;

W1和W2分别为相应时间测得的细胞含量(g/L)或OD。 三、 实验仪器、材料和用具

1. 实验材料:大肠杆菌,枯草杆菌菌液及平板; 2. 培养基:牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基

3. 实验仪器:取液器(5000ul, 1000ul 各一支);培养箱, 摇床,722s分光光度计;

4. 实验用具:无菌1000ul吸头80个;无菌5000ul吸头2个;比色皿9个+共用参比杯一个. 四、 实验步骤

1. 准备菌种:将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中,37℃振荡培养18h,另

外准备单菌落平板各1块 2. 分为三个小组: 第(1)小组

取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基, 37 ℃ 200rpm 取3.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基,37 ℃ 200rpm 取5.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基,37 ℃ 200rpm 第(2)小组

取一个大肠杆菌菌落接种到100ml培养基, 37 ℃ 200rpm 取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基,37 ℃ 110rpm 取1.0ml大肠杆菌接种到100ml培养基, 30 ℃ 200rpm 第(3)小组

取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基, 37 ℃ 200rpm 取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基, 30 ℃ 200rpm 取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基, 37 ℃ 110rpm

每培养一小时取样一次(2.5h,3.5h加测1次). 对照组测量起始pH,所有瓶子测量发酵

9h结束测pH.

3. 测量:选用600nm波长,以蒸馏水作为参比,开始培养前测定每组培养液的OD值作

为起始点。开始培养后,每小时吸取测定一次OD值。 五、 实验结果及分析 1. 实验数据:

表一 三个小组时间-OD数据

2. 作图、简要分析及代时计算:

1) 取一个大肠杆菌菌落接种到100ml培养基, 37 ℃ 200rpm

图一 单菌落大肠杆菌生长曲线

这条曲线属于比较标准的“S”形曲线,很容易看出调整期和对数期,由于单菌落菌较少,而且从固体培养基转移至液体培养基环境变化较大,所以出现了长达4小时的调整期,但可以看出,调整期之后这瓶菌都生长良好。

计算代时:取培养4小时到5小时之间的数据(对数生长期)来计算代时。 由代时计算公式,t2-t1=1h W1=0.061 W2=0.263 代时

G

t2t11h

0.474h

)/lg2(lgW2lgW1)/lg2(lg0.263lg0.061

2) 取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基,37 ℃ 110rpm

图二 大肠杆菌菌生长曲线(取1.0ml大肠杆菌接种到100ml培养基,37 ℃

110rpm)

接种后几乎没有调整期出现,大肠杆菌很快适应了新的环境并开始呈指数增长,估计是新的培养环境和原有环境较一致,而且在培养最初的时候溶氧和酸碱度都较为适宜,但是这瓶菌是稳定期OD最小的,估计是培养基最初分装不均产生的。 计算代时:取培养2小时到2.5小时之间的数据(对数生长期)来计算代时。 由代时计算公式,t2-t1=0.5h W1=0.174 W2=0.265 代时

G

t2t10.5h

0.824h

(lgW2lgW1)/lg2(lg0.265lg0.174)/lg2

3) 取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基,30 ℃ 200rpm

图三 大肠杆菌生长曲线(取1.0ml大肠杆菌接种到100ml培养基,30 ℃ 200rpm) 可以看出温度对大肠杆菌适应环境产生了一定的影响,使它在调整期滞留了较长的时间,且在对数期增长较慢,应该是酶活性对细胞复制的影响所致。 计算代时:取培养2.5小时到3.5小时之间的数据(对数生长期)来计算代时。 由代时计算公式,t2-t1=1h W1=0.168 W2=0.371 代时

G

t2t11h

0.875h

(lgW2lgW1)/lg2(lg0.371lg0.168)/lg2

4) 取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基, 37 ℃

200rpm

图四 大肠杆菌生长曲线(取1.0ml大肠杆菌接种到100ml培养基, 37 ℃ 200rpm) 这是大肠杆菌培养的最适调节,可以看出其生长良好,调整期较短,对数期较长。 计算代时:取培养2小时到3小时之间的数据(对数生长期)来计算代时。 由代时计算公式,t2-t1=1h W1=0.148 W2=0.362

代时

G

t2t11h

0.775h

(lgW2lgW1)/lg2(lg0.362lg0.148)/lg2

5) 取3.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基,37 ℃ 200rpm

图五 大肠杆菌生长曲线(取3.0ml大肠杆菌接种到100ml培养基,37 ℃ 200rpm) 接种量的增加没有产生太大的影响,生长曲线没有太大变化。

计算代时:取培养2小时到2.5小时之间的数据(对数生长期)来计算代时。 由代时计算公式,t2-t1=0.5h W1=0.218 W2=0.334

t2t10.5h

0.812h 代时 G

(lgW2lgW1)/lg2(lg0.334lg0.218)/lg2

6) 取5.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基,37 ℃

200rpm

图六 大肠杆菌生长曲线(取5.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基,37 ℃

200rpm)

3小时出现了一次明显的波动,应该是测量过程中没有摇匀的结果,忽略它之后,这条生长曲线属于正常形态,比较前两天生长曲线,发现5mL得到的最大OD反而减小了,说明在一定量的培养基下,初始接种量对最后结果影响不大。最大OD应该是受到了最初添加培养基的影响。

计算代时:取培养1小时到2小时之间的数据(对数生长期)来计算代时。 由代时计算公式,t2-t1=1h W1=0.067 W2=0.235 代时

G

t2t11h

0.552h

(lgW2lgW1)/lg2(lg0.235lg0.067)/lg2

7) 取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基, 37 ℃

200rpm

图七 枯草杆菌生长曲线(取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基, 37 ℃ 200rpm) 枯草杆菌的生长曲线包含了调整期、对数期和很小一部分稳定期,虽然稳定期很短,但是已经可以看出停止生长的趋势,说明枯草杆菌的代时较长。 计算代时:取培养3小时到4小时之间的数据(对数生长期)来计算代时。 由代时计算公式,t2-t1=1h W1=0.176 W2=0.246 代时

G

t2t11h

1.108h

(lgW2lgW1)/lg2(lg0.246lg0.176)/lg2

8) 取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基, 30 ℃ 200rpm

图八 枯草杆菌生长曲线(取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基, 30 ℃ 200rpm) 温度降低后,生长变得缓慢了,最后达到的最大OD也更小了,代时加长。 计算代时:取培养4小时到5小时之间的数据(对数生长期)来计算代时。 由代时计算公式,t2-t1=1h W1=0.158 W2=0.248 代时 G

t2t11h

1.537h

(lgW2lgW1)/lg2(lg0.248lg0.158)/lg2

9) 取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基, 37 ℃

110rpm

图九 枯草杆菌生长曲线(取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基, 37 ℃ 110rpm) 4小时时,似乎由对数期进入了稳定期,但是对比前两组数据,此时的OD值明显偏小,所以分析,可能此时突然有外因影响,使细胞进入了调整期,可以看到后来7、8小时左右细菌又有增长趋势。

计算代时:取培养2.5小时到3小时之间的数据(对数生长期)来计算代时。 由代时计算公式,t2-t1=1h W1=0.123 W2=0.223

代时

G

t2t10.5h

0.582h

(lgW2lgW1)/lg2(lg0.223lg0.123)/lg2

3. 发酵结束pH 对照组pH=7.5

实验结束后所有瓶pH均小于6.4

pH全部降低,说明大肠杆菌和枯草杆菌发酵均产生了酸。 4. 分析

表二 不同环境和菌种生长比较

1) 接种量对微生物的影响:

预期:接种量大,调整期缩短,对数期增长,稳定期OD增大,代时缩短。 原因:接种量大的细胞基数大,因而更快适应环境。

实际:调整期影响不大,对数期稍有缩短,稳定期OD减小,代时规律不明显。 分析:生长曲线受各种因素调节,这里实验结果不同于预期应该是受到培养基的限制,接种量大对氧气和原料需求更多,而且产生酸的速度也快,也许对后来的细胞生长造成了一定的影响。 2) 培养温度对微生物的影响

预期:最适温度下细胞生长应该最快,调整期最短,稳定期OD最大,代时最短 原因:温度影响细菌内酶活力和细胞膜的通透性,进而影响新陈代谢,从而影响细菌的生长繁殖。最适温度下,细菌酶活性最强,因而能最快适应环境,并取得生长增殖的最高效率。

实际:大肠杆菌37℃稳定期OD最大,调整期更短,但代时更长。枯草杆菌37℃调整期更短,对数期更长,稳定期OD更大,代时更短。

分析:大肠杆菌代时的问题应该来自实验误差,如取样未摇匀、计算时取点不够准确,或实验过程中某些操作导致生长和理论不一致。 3) 摇床转速对微生物的影响

预期:转速高,调整期短,对数期长,稳定期OD大,代时短 原因:转速影响溶氧,溶氧高,生长情况应该越好

实际:大肠杆菌与预期符合;枯草杆菌转速快的调整期长,代时长。

分析:原因可能有两点,一是枯草杆菌在溶氧高的环境下生长没有那么好,说明它是微好氧生物,但这与实际不符;二是其他条件限制,虽然说两个培养瓶进行对照要求其他条件一致,但是由于培养基分配及其其他各种原因,其他条件可能并不一

致而且还产生了比对照条件还要大的影响。 4) 生长曲线分析

两个菌的生长曲线都包括了调整期、对数期和稳定期,实验没有进行到衰亡期因为而没有观察到后来的OD值下降。 5) 大肠杆菌和枯草杆菌比较

大肠杆菌:代时要短一些,温度对代时的影响比溶氧对代时的影响要大,估计是因为溶液中细胞不多,所以溶氧的限制作用没有温度明显。

枯草杆菌:代时较长,溶氧比温度对代时的影响要大,但这也可能是实验操作中其他因素影响而得出的表观结果。

六、 实验小结

这是一个大组合作、小组分工的实验,每一组的结果都影响了整个大组队结果的分析,这就要求我们的合作。和暑期实验不同,这次实验在时间上缩短了,但是在内容上却增多了,由于有很多组的平行比较,所以得到的信息量也相应加大,这些信息中又包含了这种各样的误差,所以要求我们自己在处理别人的实验结果中也加入自己的分析。总的来说,这是个很有意思也很有意义的实验。 七、 思考

1. 计算出大肠杆菌和枯草芽孢杆菌在牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基中对数生长期中的代时

(min)(繁殖一代的时间),为什么比理论时间长好多?

代时见表二。

经查资料得:大肠杆菌理论代时为37度时18分钟,而枯草杆菌一般是给30度下的理论代时为31分钟,实验测得代时长于理论值的原因:

理论代时是在理想的培养条件下测得,糖分、氧气等营养物质供应充足,细菌生长状况良好,之前的分裂次数较少。实际实验条件与理论值条件存在差距。如培养过程中不补料,营养物质有限。单纯的振荡不能保证体系中有足够的溶氧。对培养液的pH值,氧化还原电势也未加控制,测量过程中温度不能保持稳定等等。 2. 为什么可用比浊法来表示细菌的相对生长状况?

培养液的浑浊度与细菌的浓度与成正比,可以利用分光光度计测定细菌浊液的光密度来推知菌液的浓度。浊度的变化代表体系细菌数量的变化。

其原理是:一个细胞悬浮液用肉眼观察是呈现混浊的,这是因为光线通过悬浮液是,细胞散射光线。存在的细胞数越多,分散的光线就越多,因此悬浮液浊度就越大。通过分光光度计可以检出没有被细胞散射的光线。对于大肠杆菌和枯草杆菌,从理论上OD值与细胞总量成正比。可以制备将细胞数目与浊度联系起来的标准曲线。 3. 生长曲线中为什么会有稳定期和衰退期?

当细胞的繁殖速度达到高峰时,其细胞总数就不会再增加,这是由于调整期、对数生长期两阶段糖类营养物质的消耗,代谢产物乙醇的积累及培养基的pH值、氧化还原电势的改变,对细胞产生了较大的抑制性。当死亡细胞数和繁殖细胞数接近稳定时,就出现稳定期,细胞总数处于稳定状态。

进入稳定期后,如果继续培养,由于营养物质(如糖类和氧气)的进一步消耗,代谢物的进一步积累,溶液进一步酸化,导致细胞死亡的速率提高。当细胞死亡数超过繁殖数时,活细胞总数不再稳定,生长曲线进入衰退期。 4. 什么条件下接种为宜?液体种子比固体种子有什么优越性?

接种时以分裂次数少、生长状况良好的种子为宜。

液体种子较之固体种子,迟滞期略短,对数生长期较长,代时略短,较晚进入死亡期。因为从固体中接种到培养液后,细菌需要合成新的RNA、核糖体、酶等才能适应新的生

微生物实验

长条件,需要更长的时间适应。

5. 根据实验结果,谈谈在工业上如何缩短发酵时间?

(1)保证充分的营养供应,根据细菌的特性如果是需氧的要保证充足的氧气供应,维持最适宜的温度和pH值,尽快排出代谢废物,随时观察随时监控,这样可以保证细菌的高速生长。

(2)在保证营养的前提下,可以扩大接种量,这样可以缩短调整期。

(3)选取合适的培养基、尽量是与种子生长性质相同或者相近的培养基,选取合适菌龄的种子。

八、 参考文献

陈金春、陈国强编著,微生物学实验,北京,2005。

范文四:测定细菌生长曲线 投稿:郭瀬瀭

微生物实验

实验七 测定细菌生长曲线
一、 实验目的 1. 了解细菌生长曲线特征,测定细菌繁殖的代时; 2. 学习液体培养基的配制以及接种方法; 3. 反复练习无菌操作技术; 4. 了解不同细菌,不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同; 5. 掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法 二、 实验原理 将一定量的细菌接种在液体培养基内, 在一定条件下培养, 可观察到细菌的生长繁 殖有一定的规律性,如以细菌的活菌数的对数作纵坐标,以培养时间作横坐标,可绘成 一条曲线,成为生长曲线(如图一) 。

图一 微生物生长曲线示意图 单细胞微生物的发酵具有四个阶段,即Ⅰ调整期(延滞期) 、Ⅱ对数期(生长旺盛 期) 、Ⅲ平衡期(稳定期) 、Ⅳ死亡期(衰亡期) 。 生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程的动态。 不同的微生物有不同的生 长曲线,同一种微生物在不同的培养条件下,其生长曲线也不一样。因此,测定微生物 的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。 测定微生物生长曲线的方法很多,有血球计数板法、平板菌落计数法、称重法和比 浊法等。本实验采用比浊法测定,由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比,因此,可利用 分光光度计测定细菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。将所测得的光密度值(OD600) 与其对应的培养时间作图,即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。注意,由于光密度 表示的是培养液中的总菌数, 包括活菌与死菌, 因此所测定的生长曲线的衰亡期不明显。 从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间,即代时,以 G 表示。其 计算公式为:

G=

t 2 − t1 (lg W2 − lg W1 ) / lg 2

式中 t1 和 t2 为所取对数期两点的时间; W1 和 W2 分别为相应时间测得的细胞含量(g/L)或 OD。 实验仪器、 三、 实验仪器、材料和用具 1. 实验材料:大肠杆菌,枯草杆菌菌液及平板; 2. 培养基:牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基

微生物实验

3. 实验仪器:取液器(5000ul, 1000ul 各一支);培养箱, 摇床,722s 分光光度计; 4. 实验用具:无菌 1000ul 吸头 80 个;无菌 5000ul 吸头 2 个;比色皿 9 个+共用参比杯一个. 四、 实验步骤 1. 准备菌种:将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中,37℃振荡培养 18h,另 外准备单菌落平板各 1 块 2. 分为三个小组: 第(1)小组 取 1.0ml 大肠杆菌菌液接种到 100ml 培养基, 37 ℃ 200rpm 取 3.0ml 大肠杆菌菌液接种到 100ml 培养基,37 ℃ 200rpm 取 5.0ml 大肠杆菌菌液接种到 100ml 培养基,37 ℃ 200rpm 第(2)小组 取一个大肠杆菌菌落接种到 100ml 培养基, 37 ℃ 200rpm 取 1.0ml 大肠杆菌
菌液接种到 100ml 培养基,37 ℃ 110rpm 取 1.0ml 大肠杆菌接种到 100ml 培养基, 30 ℃ 200rpm 第(3)小组 取 1.0ml 枯草杆菌接种到 100ml 培养基, 37 ℃ 200rpm 取 1.0ml 枯草杆菌接种到 100ml 培养基, 30 ℃ 200rpm 取 1.0ml 枯草杆菌接种到 100ml 培养基, 37 ℃ 110rpm 每培养一小时取样一次(2.5h,3.5h 加测 1 次). 对照组测量起始 pH,所有瓶子测量发酵 9h 结束测 pH. 3. 测量:选用 600nm 波长,以蒸馏水作为参比,开始培养前测定每组培养液的 OD 值 作为起始点。开始培养后,每小时吸取测定一次 OD 值。 五、 实验结果及分析 1. 实验数据: 表一 三个小组时间-OD 数据

开始取样时间 结束取样时间 发酵时间 单菌落 37℃110rpm 大肠 30℃200rpm 杆菌 1.0mL ODt 3.0mL 5.0mL 37℃200rpm 枯草 30℃200rpm 杆菌 37℃110rpm 单菌落 37℃110rpm 大肠 30℃200rpm OD=ODt-OD0 杆菌 1.0mL 3.0mL 5.0mL

9:55 0
0.004 -0.010 -0.010 0.010 0.039 0.067 0.008 0.013 0.007 0.004 -0.010 -0.010 0.010 0.039 0.067

10:55 11:01 1
0.024 0.049 0.043 0.070 0.096 0.134 0.023 0.032 0.017 0.020 0.059 0.053 0.060 0.057 0.067

12:01 12:09 2
0.027 0.164 0.088 0.158 0.257 0.302 0.076 0.052 0.098 0.023 0.174 0.098 0.148 0.218 0.235

12:39 12:47 2.5
0.027 0.255 0.158 0.266 0.373 0.361 0.132 0.088 0.130 0.023 0.265 0.168 0.256 0.334 0.294

13:17 13:23 3
0.025 0.312 0.242 0.372 0.420 0.334 0.184 0.091 0.230 0.021 0.322 0.252 0.362 0.381 0.267

13:53 13:59 3.5
0.036 0.327 0.361 0.436 0.451 0.456 0.254 0.125 0.253 0.032 0.337 0.371 0.426 0.412 0.389

微生物实验

37℃200rpm 30℃200rpm 37℃110rpm 开始取样时间 结束取样时间 发酵时间 单菌落 37℃110rpm 大肠 30℃200rpm 杆菌 1.0mL ODt 3.0mL 5.0mL 37℃200rpm 枯草 30℃200rpm 杆菌 37℃110rpm 单菌落 37℃110rpm 大肠 30℃200rpm 杆菌 1.0mL OD=ODt-OD 3.0mL 0 5.0mL 37℃200rpm 枯草 30℃200rpm 杆菌 37℃110rpm 枯草 杆菌

0.008 0.013 0.007

0.015 0.019 0.010

0.068 0.039 0.091

0.124 0.075 0.123

0.176 0.078 0.223

0.246 0.112 0.246

14:29 14:35 4
0.065 0.333 0.439 0.464 0.487 0.469 0.337 0.171 0.295 0.061 0.343 0.449 0.454 0.448 0.402 0.329 0.158 0.288

15:35 15:43 5
0.267 0.340 0.566 0.446 0.470 0.457 0.428 0.261 0.302 0.263 0.350 0.576 0.436 0.431 0.390 0.420 0.248 0.295

16:43 16:50 6
0.395 0.342 0.570 0.446 0.457 0.464 0.517 0.370 0.305 0.391 0.352 0.580 0.436 0.418 0.397 0.509 0.357 0.298

17:50 17:57 7
0.454 0.360 0.588 0.458 0.483 0.482 0.590 0.540 0.305 0.450 0.370 0.598 0.448 0.444 0.415 0.582 0.527 0.298

18:57 19:09 8
0.457 0.362 0.586 0.440 0.458 0.478 0.686 0.628 0.352 0.453 0.372 0.596 0.430 0.419 0.411 0.678 0.615 0.345

19:07 20:12 20:07 21:12 9 10

0.711 0.606 0.352

0.711 0.652 0.378

0.703 0.593 0.345

0.703 0.639 0.371

2. 作图、简要分析及代时计算: 1) 取一个大肠杆菌菌落接种到 100ml 培养基,

37 ℃ 200rpm

图一 单菌落大肠杆菌生长曲线 这条曲线属于比较标准的“S”
形曲线,很容易看出调整期和对数期,由于单菌落菌较 少,而且从固体培养基转移至液体培养基环境变化较大,所以出现了长达 4 小时的调整期, 但可以看出,调整期之后这瓶菌都生长良好。

微生物实验

计算代时:取培养 4 小时到 5 小时之间的数据(对数生长期)来计算代时。 由代时计算公式,t2-t1=1h W1=0.061 代时 W2=0.263

G=

t 2 − t1 1h = = 0.474h (lg W2 − lg W1 ) / lg 2 (lg 0.263 − lg 0.061) / lg 2

2) 取 1.0ml 大肠杆菌菌液接种到 100ml 培养基,37 ℃ 110rpm

图二 大肠杆菌菌生长曲线(取 1.0ml 大肠杆菌接种到 100ml 培养基,37 ℃ 110rpm) 接种后几乎没有调整期出现,大肠杆菌很快适应了新的环境并开始呈指数增长,估 计是新的培养环境和原有环境较一致,而且在培养最初的时候溶氧和酸碱度都较为 适宜,但是这瓶菌是稳定期 OD 最小的,估计是培养基最初分装不均产生的。 计算代时:取培养 2 小时到 2.5 小时之间的数据(对数生长期)来计算代时。 由代时计算公式,t2-t1=0.5h W1=0.174 代时 W2=0.265

G=

t 2 − t1 0.5h = = 0.824h (lg W2 − lg W1 ) / lg 2 (lg 0.265 − lg 0.174) / lg 2

3) 取 1.0ml 大肠杆菌菌液接种到 100ml 培养基,30 ℃ 200rpm

微生物实验

图三 大肠杆菌生长曲线(取 1.0ml 大肠杆菌接种到 100ml 培养基,30 ℃ 200rpm) 可以看出温度对大肠杆菌适应环境产生了一定的影响,使它在调整期滞留了较长的 时间,且在对数期增长较慢,应该是酶活性对细胞复制的影响所致。 计算代时:取培养 2.5 小时到 3.5 小时之间的数据(对数生长期)来计算代时。 由代时计算公式,t2-t1=1h W1=0.168 代时 W2=0.371

G=

t 2 − t1 1h = = 0.875h (lg W2 − lg W1 ) / lg 2 (lg 0.371 − lg 0.168) / lg 2

4) 取 1.0ml 大肠杆菌菌液接种到 100ml 培养基, 37 ℃ 200rpm

图四 大肠杆菌生长曲线 (取 1.0ml 大肠杆菌接种到 100ml 培养基, 37 ℃ 200rpm) 这是大肠杆菌培养的最适调节,可以看出其生长良好,调整期较短,对数期较长。 计算代时:取培养 2 小时到 3 小时之间的数据(对数生长期)来计算代时。 由代时计算公式,t2-t1=1h W1=0.148 W2=0.362

微生物实验

代时

G=

t 2 − t1 1h = = 0.775h (lg W2 − lg W1 ) / lg 2 (lg 0.362 − lg 0.148) / lg 2

5) 取 3.0ml 大肠杆菌菌液接种到 100ml 培养基,37 ℃ 200rpm

图五 大肠杆菌生长曲线(取 3.0ml 大肠杆菌接种到 100ml 培养基,37 ℃ 200rpm) 接种量的增加没有产生太大的影响,生长曲线没有太大变化。 计算代时:取培养 2 小时到 2.5 小时之间的数据(对数生长期)来计算代时。 由代时计算公式,t2-t1=0.5h W1=0.218 代时 W2=0.334

G=

t 2 − t1 0.5h = = 0.812h (lg W2 − lg W1 ) / lg 2 (lg 0.334 − lg 0.218) / lg 2

6) 取 5.0ml
大肠杆菌菌液接种到 100ml 培养基,37 ℃ 200rpm

图六 大肠杆菌生长曲线(取 5.0ml 大肠杆菌菌液接种到 100ml 培养基,37 ℃

微生物实验

200rpm) 3 小时出现了一次明显的波动,应该是测量过程中没有摇匀的结果,忽略它之后, 这条生长曲线属于正常形态,比较前两天生长曲线,发现 5mL 得到的最大 OD 反而 减小了,说明在一定量的培养基下,初始接种量对最后结果影响不大。最大 OD 应 该是受到了最初添加培养基的影响。 计算代时:取培养 1 小时到 2 小时之间的数据(对数生长期)来计算代时。 由代时计算公式,t2-t1=1h W1=0.067 代时 W2=0.235

G=

t 2 − t1 1h = = 0.552h (lg W2 − lg W1 ) / lg 2 (lg 0.235 − lg 0.067) / lg 2
37 ℃ 200rpm

7) 取 1.0ml 枯草杆菌接种到 100ml 培养基,

图七 枯草杆菌生长曲线(取 1.0ml 枯草杆菌接种到 100ml 培养基, 37 ℃ 200rpm) 枯草杆菌的生长曲线包含了调整期、对数期和很小一部分稳定期,虽然稳定期很短, 但是已经可以看出停止生长的趋势,说明枯草杆菌的代时较长。 计算代时:取培养 3 小时到 4 小时之间的数据(对数生长期)来计算代时。 由代时计算公式,t2-t1=1h W1=0.176 代时 W2=0.246

G=

t 2 − t1 1h = = 1.108h (lg W2 − lg W1 ) / lg 2 (lg 0.246 − lg 0.176) / lg 2
30 ℃ 200rpm

8) 取 1.0ml 枯草杆菌接种到 100ml 培养基,

微生物实验

图八 枯草杆菌生长曲线(取 1.0ml 枯草杆菌接种到 100ml 培养基, 30 ℃ 200rpm) 温度降低后,生长变得缓慢了,最后达到的最大 OD 也更小了,代时加长。 计算代时:取培养 4 小时到 5 小时之间的数据(对数生长期)来计算代时。 由代时计算公式,t2-t1=1h W1=0.158 代时 W2=0.248

G=

t 2 − t1 1h = = 1.537 h (lg W2 − lg W1 ) / lg 2 (lg 0.248 − lg 0.158) / lg 2

9) 取 1.0ml 枯草杆菌接种到 100ml 培养基, 37 ℃ 110rpm

图九 枯草杆菌生长曲线(取 1.0ml 枯草杆菌接种到 100ml 培养基, 37 ℃ 110rpm) 4 小时时,似乎由对数期进入了稳定期,但是对比前两组数据,此时的 OD 值明显偏小,所 以分析,可能此时突然有外因影响,使细胞进入了调整期,可以看到后来 7、8 小时左右细 菌又有增长趋势。 计算代时:取培养 2.5 小时到 3 小时之间的数据(对数生长期)来计算代时。 由代时计算公式,t2-t1=1h W1=0.123 W2=0.223

微生物实验

代时

G=

t 2 − t1 0.5h = = 0.582h (lg W2 − lg W1 ) / lg 2 (lg 0.223 − lg 0.123) / lg 2

3. 发酵结束 pH 对照组 pH=7.5 实验结束后所有瓶 pH 均小于 6.4 pH 全部降低,说明大肠杆菌和枯草杆菌发酵均产生了酸。 4. 分析 表二 不同环境和菌种生长比较 培养菌 接种量 培养 温度 / ℃ 摇床 转速 /rpm 生长曲线状态 调整 期/h 对数 期/h 代时 /min 28.5 49.4 5
2.5 46.5 48.7 33.1 66.5 92.2 34.9

稳定期 OD(取 8 小时 OD) 0.453 0.372 0.596 0.430 0.419 0.411 0.678 0.615 0.345

大肠杆 菌

单菌落 1.0mL 1.0mL 1.0mL 3.0mL 5.0mL 1.0mL

枯草杆 菌

37 37 30 37 37 37 37 30 37

200 110 200 200 200 200 200 200 110

4 1 2 1 1 1 2 3 1

3 3 3 3 2 2 6 5 3

1) 接种量对微生物的影响: 预期:接种量大,调整期缩短,对数期增长,稳定期 OD 增大,代时缩短。 原因:接种量大的细胞基数大,因而更快适应环境。 实际:调整期影响不大,对数期稍有缩短,稳定期 OD 减小,代时规律不明显。 分析:生长曲线受各种因素调节,这里实验结果不同于预期应该是受到培养基的限 制,接种量大对氧气和原料需求更多,而且产生酸的速度也快,也许对后来的细胞 生长造成了一定的影响。 2) 培养温度对微生物的影响 预期:最适温度下细胞生长应该最快,调整期最短,稳定期 OD 最大,代时最短 原因:温度影响细菌内酶活力和细胞膜的通透性,进而影响新陈代谢,从而影响细 菌的生长繁殖。最适温度下,细菌酶活性最强,因而能最快适应环境,并取得生长 增殖的最高效率。 实际:大肠杆菌 37℃稳定期 OD 最大,调整期更短,但代时更长。枯草杆菌 37℃调 整期更短,对数期更长,稳定期 OD 更大,代时更短。 分析:大肠杆菌代时的问题应该来自实验误差,如取样未摇匀、计算时取点不够准 确,或实验过程中某些操作导致生长和理论不一致。 3) 摇床转速对微生物的影响 预期:转速高,调整期短,对数期长,稳定期 OD 大,代时短 原因:转速影响溶氧,溶氧高,生长情况应该越好 实际:大肠杆菌与预期符合;枯草杆菌转速快的调整期长,代时长。 分析:原因可能有两点,一是枯草杆菌在溶氧高的环境下生长没有那么好,说明它 是微好氧生物,但这与实际不符;二是其他条件限制,虽然说两个培养瓶进行对照 要求其他条件一致,但是由于培养基分配及其其他各种原因,其他条件可能并不一

微生物实验

致而且还产生了比对照条件还要大的影响。 4) 生长曲线分析 两个菌的生长曲线都包括了调整期、对数期和稳定期,实验没有进行到衰亡期因为 而没有观察到后来的 OD 值下降。 5) 大肠杆菌和枯草杆菌比较 大肠杆菌:代时要短一些,温度对代时的影响比溶氧对代时的影响要大,估计是因 为溶液中细胞不多,所以溶氧的限制作用没有温度明显。 枯草杆菌:代时较长,溶氧比温度对代时的影响要大,但这也可能是实验操作中其 他因素影响而得出的表观结果。 六、 实验小结 这是一个大组合作、小组分工的实验,每一组的结果都影响了整个大组队结果的分析, 这就要求我们的
合作。和暑期实验不同,这次实验在时间上缩短了,但是在内容上却增 多了,由于有很多组的平行比较,所以得到的信息量也相应加大,这些信息中又包含了 这种各样的误差, 所以要求我们自己在处理别人的实验结果中也加入自己的分析。 总的 来说,这是个很有意思也很有意义的实验。 七、 思考 1. 计算出大肠杆菌和枯草芽孢杆菌在牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基中对数生长期中的代时 (min)(繁殖一代的时间) ,为什么比理论时间长好多? 代时见表二。 经查资料得:大肠杆菌理论代时为 37 度时 18 分钟,而枯草杆菌一般是给 30 度下 的理论代时为 31 分钟,实验测得代时长于理论值的原因: 理论代时是在理想的培养条件下测得,糖分、氧气等营养物质供应充足,细菌生长 状况良好,之前的分裂次数较少。实际实验条件与理论值条件存在差距。如培养过程中 不补料,营养物质有限。单纯的振荡不能保证体系中有足够的溶氧。对培养液的 pH 值, 氧化还原电势也未加控制,测量过程中温度不能保持稳定等等。 2. 为什么可用比浊法来表示细菌的相对生长状况? 培养液的浑浊度与细菌的浓度与成正比,可以利用分光光度计测定细菌浊液的光密度来 推知菌液的浓度。浊度的变化代表体系细菌数量的变化。 其原理是:一个细胞悬浮液用肉眼观察是呈现混浊的,这是因为光线通过悬浮液是,细 胞散射光线。存在的细胞数越多,分散的光线就越多,因此悬浮液浊度就越大。通过分 光光度计可以检出没有被细胞散射的光线。对于大肠杆菌和枯草杆菌,从理论上 OD 值 与细胞总量成正比。可以制备将细胞数目与浊度联系起来的标准曲线。 3. 生长曲线中为什么会有稳定期和衰退期? 当细胞的繁殖速度达到高峰时,其细胞总数就不会再增加,这是由于调整期、对数 生长期两阶段糖类营养物质的消耗,代谢产物乙醇的积累及培养基的 pH 值、氧化还原 电势的改变,对细胞产生了较大的抑制性。当死亡细胞数和繁殖细胞数接近稳定时,就 出现稳定期,细胞总数处于稳定状态。 进入稳定期后,如果继续培养,由于营养物质(如糖类和氧气)的进一步消耗,代 谢物的进一步积累,溶液进一步酸化,导致细胞死亡的速率提高。当细胞死亡数超过繁 殖数时,活细胞总数不再稳定,生长曲线进入衰退期。 4. 什么条件下接种为宜?液体种子比固体种子有什么优越性? 接种时以分裂次数少、生长状况良好的种子为宜。 液体种子较之固体种子,迟滞期略短,对数生长期较长,代时略短,较晚进入死亡期。 因为从固体中接种到培养液后,细菌需要合成新的 RNA、核糖体、
酶等才能适应新的生

微生物实验

长条件,需要更长的时间适应。 5. 根据实验结果,谈谈在工业上如何缩短发酵时间? (1)保证充分的营养供应,根据细菌的特性如果是需氧的要保证充足的氧气供应,维持最 适宜的温度和 pH 值,尽快排出代谢废物,随时观察随时监控,这样可以保证细菌的高速生 长。 (2)在保证营养的前提下,可以扩大接种量,这样可以缩短调整期。 (3)选取合适的培养基、尽量是与种子生长性质相同或者相近的培养基,选取合适菌龄的 种子。 八、 参考文献 陈金春、陈国强编著,微生物学实验,北京,2005。


范文五:细菌生长曲线的测定 投稿:张笎笏

细菌生长曲线的测定

1 目的

1.1 了解细菌生长曲线特点及测定原理

1.2 学习用比浊法测定细菌的生长曲线

2 原理

将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中,在适宜的条件下进行培养,定时测定培养液中的菌量,以菌量的对数作纵坐标,生长时间作横坐标,绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同,一般可把生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期。这四个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所改变。因此通过测定微生物的生长曲线,可了解各菌的生长规律,对于科研和生产都具有重要的指导意义。

测定微生物的数量有多种不同的方法,可根据要求和实验室条件选用。本实验采用比浊法测定,由于细菌悬液的浓度与光密度(OD值)成正比,因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度,并将所测的OD值与其对应的培养时间作图,即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线,此法快捷、简便。

3 材料

3.1菌种

大肠杆菌

3.2培养基

肉膏蛋白胨培养基

3.3 仪器和器具

721分光光度计,比色杯,恒温摇床,无菌吸管,试管,三角瓶。

4 流程

种子液→标记→接种→培养→测定

5 方法

5.1种子液制备

取大肠杆菌斜面菌种1支,以无菌操作挑取1环菌苔,接入肉膏蛋白胨培养液中,静止培养18h作种子培养液。

5.2标记编号

取盛有50mL无菌肉膏蛋白胨培养液的250mL三角瓶11个,分别编号为0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、20h。

5.3接种培养

用2mL无菌吸管分别准确吸取2mL种子液加入已编号的11个三角瓶中,于37℃下振荡培养。然后分别按对应时间将三角瓶取出,立即放冰箱中贮存,待培养结束时一同测定OD值。

5.4生长量测定

将未接种的肉膏蛋白胨培养基倾倒入比色杯中,选用600nm波长分光光度计上调节零点,作为空白对照,并对不同时间培养液从0h起依次进行测定,对浓度大的菌悬液用未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基适当稀释后测定,使其OD值在0.10.~0.65以内,经稀释后测得的OD值要乘以稀释倍数,才是培养液实际的OD值。

6 结果

6.1 将测定的OD值填入下表:

时 间(h) 对照 0 1.5 3 4 6 8 10 12 14 16 20

光密度值(OD600)

6.2 以上述表格中的时间为横坐标,OD600 值为纵坐标,绘制大肠杆菌的生长曲线。

范文六:细菌生长曲线的测定 投稿:孔柧柨

实验五 细菌生长曲线的测定

一、 实验目的

1、 了解细菌生长曲线特点及测定原理 2、 学习用比浊法测定细菌的生长曲线 二、 实验原理

大多数细菌的繁殖速率很快,在合适的条件下,一定时期的大肠杆菌细胞每20min分裂一次。将一定量的细菌转入新鲜液体培养基中,在适宜的条件下培养细胞要经历延迟期,对数期,稳定期和衰亡期四个阶段。以培养时间为横坐标,以细菌数目的对数或生长速率为纵坐标作图所绘制的曲线称为该细菌的生长曲线。不同的细菌在相同的培养条件下其生长曲线不同,同样的细菌在不同的培养条件下所绘制的生长曲线也不相同。

测定微生物的数量有多种不同的方法,可根据要求和实验室条件选用。本实验采用比浊法测定,由于在一定的范围内,微生物细胞浓度与透光度成反比,与光密度(OD值)成正比,因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度,并将所测的OD值与其对应的培养时间作图,即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线,此法快捷、简便。 三、 实验材料

1、 菌种:大肠杆菌

2、 培养基: LB液体培养基/牛肉膏蛋白胨液体培养基

3、 仪器和器具:721分光光度计,比色杯(1cm),恒温摇床,无菌吸管(5mL),大试管,

三角瓶(250mL)。

四、 实验流程

标记→接种→培养→测定

五、 操作步骤

1、 标记:取11支无菌大试管,用记号笔分别标明培养时间,即0,1.5,3,4,6,8,

10,12,14,16和20h。

2、 接种:分别用5mL无菌吸管吸取2.5mL大肠杆菌过夜培养液(培养10~12h)转入盛有

60 mL 液体培养基的三角瓶内,混合均匀后分别取5mL混合液加至上述标记的11支无菌大试管中。

3、 培养:将已接种的试管置摇床37℃振荡培养(振荡频率200~250r/min),分别培养0,

1.5,3,4,6,8,10,12,14,16和20h,将标有相应时间的试管取出,立即放4℃贮存,最后一同比浊测定其光密度值。

4、 比浊测定:用未接种的液体培养基作空白对照,选用600nm波长进行光电比浊测定。

从早取出的培养液开始依次测定,对细胞密度大的培养液用液体培养基适当稀释后测定,使其OD600在0.1~0.65之内 (测定OD值前,将待测定的培养液振荡,使细胞均匀分布)。

六、 注意事项

1、 测定OD值时,要求从低浓度到高浓度测定。 2、 严格控制培养时间。 七、 实验结果

1、 将测定的OD值填入下表:

2、 以上述表格中的时间为横坐标,OD600值为纵坐标,绘制大肠杆菌的生长曲线。 八、 思考

1、 根据实验数据画出生长曲线,并说明细菌生长特征。

2、 若同时用平板计数法测定,所绘出的生长曲线与用比浊法测定绘出的生长曲线有何

差异?为什么?

3、 次生代谢产物的大量积累在哪个时期?根据细菌生长繁殖的规律,采用哪些措施可

使次生代谢产物积累更多?

范文七:细菌生长曲线之测定 投稿:黄熲熳

實驗六 細菌生長曲線之測定

◎ Exp 11. Turbidity of bacteria

一、目的:

在進行細菌生長曲線之測定前,必須先了解 U-2001 Spectropho-tometer 操作方法,才能將細菌的數量以吸光值的方式表示出來。

二、原理:

請詳讀整理 p. 90-92,學會調整 Optical density (O.D.) 【Exp 13.會用到】。

三、器材:

1. culture:(每組)

24 hr Escherichia coli (broth)

2. medium: (每組) Nutrient broth

3. equipment :

1 ml pipette,pipette aid,cuvette,拭鏡紙,廢菌液杯,裝蒸餾水的洗瓶,滅菌空試管,U-2001 Spectrophotometer,振盪器。

四、實驗步驟

※ 由助教先示範操作方法,再由學生自行操作與測量待測液之吸光值。 1. 了解 U-2001 Spectrophotometer 操作方法: a. 溫機約 15 分鐘。

b. MENU → (主目錄) 選 1. Photometer → 輸入波長 600 nm 及 ABS → Forward →

c. Nutrient broth 歸零 autozero → (前、後二支 cuvette) ※1

d. 取出後面之 cuvette ,倒入待測液※2,等到右上方數據穩定後,按下 Start → 記錄。

※1 cuvette 有石英管 (測波長 340 nm 以下)、玻璃管、塑膠管等材

質,本實驗使用塑膠材質之比色管。

※2 每次測定前需先用蒸餾水滴洗 cuvette,再以待測液潤濕,倒

掉,再裝入待測液,測完倒掉,用蒸餾水滴洗。測定之前

cuvette 須用拭鏡紙擦乾,手握管的非透明處;廢菌液請滴洗入廢菌液杯中,集中處理) 。

2. 每組取一管助教所準備之E. coli 當待測液,實際演練 U-2001 Spectrophotometer 操作,測出其原液 O.D. 【Exp 13. 將會利用到此操作,故須熟悉其操作步驟】 。

◎ Exp 12. Serial Dilution-Agar Plate Procedure to Quantitate Viable Cells

一、目的:

1. 學習連續稀釋法。 2. 觀察活菌數。

二、原理:

微生物數目之計數法有:

1. 直接顯微鏡計數 (Direct Microscopic Counts):

以 Petroff Hauser chamber 計數。僅計數微量菌液,再由數學方法求取總菌數,此法迅速方便但活與死菌皆涵蓋之且總菌數若低於一百萬時,準確度差。

2. 電子細胞計數器 (Electronic Cell Counters):如 Coulter Counter,此法不能區分活或死菌,也無法區別惰性顆粒物質與細胞物質。

3. 化學方法 (Chemical Methods):以間接測定蛋白質濃度、DNA 產量、細胞質量及代謝物等反推菌數。

4. 分光光度計分析 (Spectrophotometric Analysis):利用穿透菌液之光線量,隨菌量增加而減少。此法迅速但菌數若低於一千萬時,敏感度差。

5. 連續稀釋-洋菜平板法 (Serial Dilution-Agar Plate):此法乃計數活菌。利用無菌水對菌液做一連串稀釋,採 Pour Plate 法進行之,經隔夜培養後計數 (或者使用Quebec,參考課本 Figure 21.4, p. 89)。

本實驗課中繪製細菌生長曲線之方法便是利用連續稀釋-洋菜平板法,故Exp 12 與細菌生長曲線之測定一併進行。

◎ Exp 13. The Bacterial Growth Curve

一、目的:

了解細菌的族群生長變動,繪製生長曲線 (growth curve),並求出增代時間 (generation time)。

二、原理:

a. 細胞的生長:將細菌接種在液態培養基中,置於其最適環境下 (最適溫度、pH 及氣體組成) 培養,則可求出一細菌生長曲線。細菌之生長曲線可分成以下數個時期:

1. 遲滯期 (lag phase):細胞正在適應新環境,數目無明顯增加。 2. 對數期 (log phase):細胞生長快速,數目呈幾何級數增加。

3. 靜止期 (stationary phase):因養分耗盡、代謝廢物的堆積,細胞分裂與死亡速度相當,故其數目不增加。

4. 死滅期 (death phase):細胞快速死亡,數目呈幾何級數下降。

b. 生長曲線之測量:可用 pour plate 法,直接求得活細胞數目,或是用分光光度計讀值法,間接推測細胞生長量。之後在半對數方格紙上作圖。

c. generation time 的計算:

1. 較粗略的計算 (分光光度計結果): GT = t (O.D. 2n) - t (O.D. n) GT:generation time

2. 直接細胞數目的計算 (pour-plate 之結果):

t log 2

=GT

log b - log B

B:在 log phase 上一點的細胞數目。 b:在 log phase 上另一點的細胞數目。 t:B 點與 b 點的間隔時間。

三、器材:

1. culture:(每組)

12 hr Escherichia coli

2. medium:

100 ml BHI 1 瓶 (棉花頭三角瓶) 99 ml 無菌水 18 瓶 (稀釋牛奶瓶)

400 ml NA 1瓶 (放於 50℃ Water Bath 中)

3. Equipment :(每組) 37℃ shaker incubator U-2001 spectrophotometer petri dishes 24 個 micropipettes 1 ml 與 200µl micropipette tips (滅菌盒中) 滅菌空試管 6 支 cuvette 1 支 安全吸球

10 ml sterilized pipettes 6 支

計時器(自備)、廢菌液杯、拭鏡紙、裝蒸餾水的洗瓶、振盪培養箱。

四、實驗步驟

1. 標示工作:(班別、實驗組別、日期)

a. 無菌水:t0,t30,t60,t90,t120,t150 (每個 t 有 3 個稀釋度即 10-2,10-4,10-6 故共有 6×3 = 18 瓶)

b. petri dishes:每個 t 標示有 10-4,10-5,10-6,10-7 故共有 24 個。 2. 流程:(參照 Fig. 21.1)

1a. 取 5 ml 的 log phase E. coli culture 到 100 ml BHI broth,測 600 nm 下之 O.D. 值,記錄之並登錄於黑板。(為t0)

1b. 取 1a. 0.1 ml 到 9.9 ml 無菌水稀釋瓶中 → t0,10-2。 1c. 取 1b. 0.1 ml 到 9.9 ml 無菌水稀釋瓶中 → t0,10-4。 1d. 取 1c. 0.1 ml 到 9.9 ml 無菌水稀釋瓶中 → t0,10-6。

☆ 1b. ~ 1d. mixing sample 的方法請參考課本 Figure 21.3, p. 89。 △ 使用安全吸球請小心,玻璃 pipettes 及pipette tips 用完後請分別丟入回收桶中,待下課後一併滅菌清洗或丟棄。 2a. 取 1c. 1 ml 做 pour plate ※1 → t0,10-4。

0.1 ml 做 pour plate → t0,10-5。

2b. 取 1d. 1 ml 做 pour plate → t0,10-6。

0.1 ml 做 pour plate → t0,10-7。

☆ 完成 2a.的 plate 待凝固倒置培養 37℃,24hr 後記錄菌數並登錄於黑板※2。

3. 當 1a. 已做完 1b. 放入 shaker 120 rpm 37℃,30 分鐘 (為t30)※3。 4. 測 O.D.。(記錄之並登錄於黑板) ※4 5. 重覆 1b.~2b. 6. 重覆 3.(為t60)

7. 其它 t90,t120,t150 依此類推。

◆ 100 ml BHI 三角瓶,每一次完成 30 分鐘的培養後,於測 O.D. 前,可先取出 5 ml 於滅菌空管中,三角瓶馬上再放入 shaker incubator 中培養,以節省時間,之後再分別進行測 O.D. 及稀釋工作。廢液丟在稀釋過不用的牛奶瓶中。

※1 倒 plate 時,培養基量約 2/3 圓面積,倒完馬上蓋蓋子並前後左右各

輕搖 3 次,使 培養基充滿於 petri dish 底部,但需小心勿將培養基 搖出碰 到蓋壁。

※2 菌數若為 TNTC 或 TFTC 也請算出約略菌數。 (一個 plate 可接受菌

落菌數在 30 - 300 個之間)

※3 100 ml BHI 三角瓶的 culture,需於放入 shaker incubator 後才能開

始計時。

※4 O.D.若 > 0.6 請稀釋再測,稀釋倍數需記錄。 (O.D. 值在 0.1~0.6

之間較可信,為在線性範圍內) ※5 cuvette 回收。

* 實驗後的觀察注意事項: 1. 實驗結果之紀錄法:

TNTC (too numerous to count):每個 plate 菌落數大於 300 個,請畫

區域約略算出菌數,登記如下:TNTC (1256)。

TFTC (too few to count):每個 plate 菌落數小於 30 個,請算出菌數,

登記如下:TFTC (12)。

每個培養時間點須至少有一個 plate 菌落數在 30-300 內,如 t30 的 10-6 稀釋度有 40 個菌落則登記為 40×106,若有二個 plate 菌落數在 30~300 內則須明列出,並於括號內記錄平均值。

2. 每個 plate 上的菌落,不管大小皆算是 E. coli。

3. 若 plates 的 colony 數目在 30~300 內則須用麥克筆在背面點算詳細,若超過此範圍才可以畫區域倒推算出約略數目,如此可以知道是否菌數有隨培養時間增長而增加,但登記在結果表中時只須記錄 30~300 的 plate 即可。

4. 每毫升菌液有多少菌數算法請參考課本 p. 90 的例子 5. plates 算完後,請放到 8A 桌待滅菌。

范文八:细菌生长曲线的测定 投稿:薛顁顂

一:细菌生长曲线的测定

1 目的

1.1 了解细菌生长曲线特点及测定原理

1.2 学习用比浊法测定细菌的生长曲线

2 原理

将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中,在适宜的条件下进行培养,定时测定培养液中的菌量,以菌量的对数作纵坐标,生长时间作横坐标,绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同,一般可把生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期。这四个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所改变。因此通过测定微生物的生长曲线,可了解各菌的生长规律,对于科研和生产都具有重要的指导意义。

测定微生物的数量有多种不同的方法,可根据要求和材料

3.1菌种

大肠杆菌

3.2培养基

肉膏蛋白胨培养基

3.3 仪器和器具

721分光光度计,比色杯,恒温摇床,无菌吸管,试管,三角瓶。

4 流程

种子液→标记→接种→培养→测定

5 方法

5.1种子液制备

取大肠杆菌斜面菌种1支,以无菌操作挑取1环菌苔,接入肉膏蛋白胨培养液中,静止培养18h作种子培养液。

5.2标记编号

取盛有50mL无菌肉膏蛋白胨培养液的250mL三角瓶11个,分别编号为0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、20h。

5.3接种培养

用2mL无菌吸管分别准确吸取2mL种子液加入已编号的11个三角瓶中,于37℃下振荡培养。然后分别按对应时间将三角瓶取出,立即放冰箱中贮存,待培养结束时一同测定OD值。

5.4生长量测定

将未接种的肉膏蛋白胨培养基倾倒入比色杯中,选用600nm波长分光光度计上调节零点,作为空白对照,并对不同时间培养液从0h起依次进行测定,对浓度大的菌悬液用未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基适当稀释后测定,使其OD值在0.10.~0.65以内,经稀释后测得的OD值要乘以稀释倍数,才是培养液实际的OD值。

6 结果

6.1 将测定的OD值填入下表:

时 间(h) 对照 0 1.5 3 4 6 8 10 12 14 16 20

光密度值(OD600)

6.2 以上述表格中的时间为横坐标,OD600 值为纵坐标,绘制大肠杆菌的生长曲线。

范文九:细菌生长曲线测定方案 投稿:石脦脧

细菌生长曲线的测定

1 目的

1.1 了解细菌生长曲线特点及测定原理

1.2 学习用比浊法测定细菌的生长曲线

2 原理

将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中,在适宜的条件下进行培养,定时测定培养液中的菌量,以菌量的对数作纵坐标,生长时间作横坐标,绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同,一般可把生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期。这四个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所改变。因此通过测定微生物的生长曲线,可了解各菌的生长规律,对于科研和生产都具有重要的指导意义。

测定微生物的数量有多种不同的方法,可根据要求和实验室条件选用。本实验采用比浊法测定,由于细菌悬液的浓度与光密度(OD值)成正比,因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度,并将所测的OD值与其对应的培养时间作图,即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线,此法快捷、简便。

3 材料

3.1菌种

某细菌

3.2培养基

液体培养基

3.3 仪器和器具

721分光光度计,比色杯,恒温摇床,无菌吸管,试管,三角瓶。

4 流程

种子液→标记→接种→培养→测定

5 方法

5.1种子液制备

取细菌斜面菌种1支,以无菌操作挑取1环菌苔,接入肉膏蛋白胨培养液中(液体培养基接种法),静止培养24h作种子培养液。

5.2标记编号

取盛有50mL无菌肉膏蛋白胨培养液的250mL三角瓶11个,分别编号为0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、20h。

5.3接种培养

用2mL无菌吸管分别准确吸取2mL种子液加入已编号的11个三角瓶中,于37℃下振荡培养。然后分别按对应时间将三角瓶取出,立即放冰箱中贮存,待培养结束时一同测定OD值。

5.4生长量测定

将未接种的肉膏蛋白胨培养基(空白对照)倾倒入比色杯中,选用600nm波长分光光度计上调节零点,作为空白对照,并对不同时间培养液从0h起依次进行测定,对浓度大的菌悬液用未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基适当稀释后测定,使其OD值在0.10.~0.65以内,经稀释后测得的OD值要乘以稀释倍数,才是培养液实际的OD值。

6 结果

6.1 将测定的OD值填入下表:

时 间(h) 对照 0 1.5 3 4 6 8 10 12 14 16 20

光密度值(OD600) 0

6.2 以上述表格中的时间为横坐标,OD600 值为纵坐标,绘制细菌的生长曲线。

Point:

1液体培养基的配制以及接种方法

2无菌操作技术

3直接计数法

范文十:细菌生长曲线在临床检测中的实际应用 投稿:韩飘飙

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, 一f 4  

1  4 陕 西医 学 检验 第 1 卷 第 1期 2 0 6 0 0年 2月  

细菌生长 曲线在临床检测中的实际应用 

卓健 生

—— —一

A/  

/、 丫b    。

706 ) /  10 1

卢 云  

_  ‘ —— 一

 

罗小兵 

( 西安医 科大学第一 临床医学院

西安

要  目的 : 探讨微 生物生长 曲线在 细菌检测 中的临床 意 j 。方法 : 5 9 患者微 生物 生长 曲线进行  L 对 3例

回顾性 分析 、 分型 。结果 : 茵培 养总 阳性 率为 3.8 ; 增 茵后 6 4h时区 内特 种 , 离培 养 阳性率  细 25  在 ~2  分 最 高 ( 51 ) 陡 峭 型 曲 线 在 所 有 曲 线 中所 占比 例 最 大 (86  ) 细 茵 分 离 培 养 阳 性 率 最 高 9   ; 7. 7 且  

( 5 2  ) 而 中问厦 平缓型 生长 曲线 的存在是 细 菌分 离培 养失败的 重要 原 因 结论 : 用微 生 物生 长曲  9.8 ,   利

线不仅可连 续观 察 细菌生长分型 , 而且 可明显提 高细菌的培养 阳性 率。  

关 词 墼 塑 堡  键 生 圭 堕

翘一 重  

Cln c lVa u   fM ir b cG r wt   i ia  l e o   c o i  o h Cur e i  c e i  li a i g v  n Ba t raCu tv tn  

Z u   in S e g LU  n YANG  o LUO  a - B n   h oJa — h n   Yu   Du   Xio- ig

( h   i t f iae   o i l ’nMe i l nvri   ’n7 0 6 ) T eF r   fl t H s t — d   dc   iesyXi   1 0 1  sA i d pa  aU t a

A s a tO jcie To s u y t e c i ia  a u   f mir b c g o h c r e i  a tra c lia i g bt c bet   r   v   t d   h   l c lv l e o   c o i r wt   u v   n b c e i  u t tn  Meh d n   v to  

W e e r s e tv [  n ls d 5 9 p te t ’ c o i g o h c r e r to p c ie y a ay e   3   a in s mir b c r wt   u v .R s ls Th   o a  o iier t   fb c e i c [[a i g i   e u t  et t lp stv   a i o   a t ra u tv tn     o   s 3. 8 2 5  a d t ep st er t e c  h i p a s 9 .   )a t r6 2   o r   f u t a i g Th   te   y e 0  

r wt   u y     n   h   o i v  a e r a h t er e k ( 5 1 i   le   ~ 4h u so   t v t . e s e p t p   f o h c r ei c i n g s

man( 8 6   )a d isp st er t i h   ihet 9   8 ) teg o hc r e0 midea d fa y ea et eman ta  i 7. 7 n t   oii  a i stehg s ( 5 2   .h   r wt  u v  f d l n i ttp   r h ’ v o   i e—

sn  h t e dt  ut r g b cei fi r. o cu in Usn   ir bc g o h c r e we c r n t o l  b e v   0 sta  a  oc l i   atr  al e C n ls   L un a u o i g m c o i r wt   u v ,   al o   n y o s r e     t e g o h c r e a d t p s o   a t ra c lia i g b ta s  mp o e i   o i v   a i. h   r wt   u v   n  y e   fb c e i  u t tn   u   lo i r v   t p st e r t   v s i o

Ke   r s M i o i g o h c r e Cu t a ig Ba t r   y wo d   c b c r wt   u v   r   li tn   v ce i a

微生物生长 曲线过去仅局限于理 论研究 . 有关其临床 

应 用 尚未 见 报 道 , 院 自 19 我 9 5年 5 引 进 B T AL R   月 AC / E T I 0 生物 检 铡 系统 后 .   微 2 应用 其 配 置 的 数据 管 理 系 统对 5  3  9 例 患 者 各 种 细 菌 标 本 的 微 生物 生 长 曲线 进 行 了 检测 分 析 ,   报 告如 下 :   1 对 象 和方 法  I1 研究对泉 . 自 19 年 5月 本 院连 检 的 141倒 患 者   5 9  2

12 4 实 验 仪 器 : A / L R   2 .. B CT A E T 10微 生 物 检 测 系 统  ( 括 恒 温 震 荡连 续 检 测 自动 培 养 仪 及数 据 管 理 系 统 )美  包 ; 国 0 GA N TE NI 公 司 .C P OR 微生 物 鉴 定 系 R NO   K KA SET   统 ( 括 微 生物 鉴 定 及 药 敏 自动 检 测 仪 及数 据 管 理 系 统 ) 包 ;  

美 国 B CT   C I S E ON DI K N ON 公 司  

2 结果 

2 1 不 同标 本 中细 茵 培 养检 出率 .  

14 1倒患 者 细 菌 培养   2

各种 新鲜细 菌标 本 ( 括血渍 . 包 脑脊 液 . 胸水 , 腹水 , 汁  胆 等 ) 其 中需 氧培养 12 2例 (5 2  ) 厌 氧培养 29例

  .  1 8. 9 , 0 (4 7  )男 8 4 , 57倒 , 1. 1 . 9 倒 女   2 年龄从 3ro到 8   l t 1Y不等。  

12 . 方 法 

后 . 菌 总 检 出率 为 3 .8 ( 6/  2 ) 捡 出率 最 高 的标  细 25  4 3 14 1 ; 本 为脓 液 . 4. 5 (  2 ) 最 低 为 腹 透 液 2  0 (/ 达 8 1  1 /7 ; 3 0 o  6  3 )标 本 含 量最 大 为 血 液 (  9 0; 111例 , 8 . 1 ) 其 细 菌  占 38  ,

检出率为 3. 3 (1 /6 ) . 28  4  43 )需氧细菌检出率为 3. 2 6 43  (1/ 6)厌 氧菌中细菌检出率为 2. 9 (7 2 6  46 4 3 . 2 4  4 10 )

2 2 微 生 轴 生长 曲线 分 型  141饲 患 者细 菌标 本 增 菌 阳 .  2  

12 1 标 本 采 集 : 次性 无 菌 注射 器采 取新 鲜 标 本 5 1  ..  一 ~ 0 m1注 人 B C AL R 增 菌 瓶 内 ( , A K/ E T 厌氧 菌 要 求 1ri   n内完  a

成 )  。

性 5 9饲. 3 根据其微生物生长曲线分为三型    中间  腱● 型.

型 、 援 型 ( 1 。其 中 陡 峭 型 所 占 比饲 最 大 . 7. 7 平 图 ) 为 86  (9/ 2 )且 分 离 阳性 率 最 高  9 .8 ( 0/ 2 )  3 8 44 , 达 52  4 4 44 。

12 2 增 菌 : 菌 瓶 放 ^ B CK A E T 恒 温 振 荡 培 养  .  增 A /L R 箱 中 自动 培 养 1 6d 底 部 感 应 器 显 示 为 阳 性 者 根据 其 微  ~  .

生 物生长曲线. 于对数生长期 或稳定期取出做转种 , 分离 培  养.  后仍 为阴性者. 6d 视为培养阴性.   1 . 培养 及鉴定 :  23 快逮转种到琼脂板后 t7 c恒温 2   3。 4 h 后取出 . 制备 l ml O/ 标准菌悬液 . l  放A  om 增 茁  取 O 1 】 管 内. 种 到 S E T 转 C P OR 培 养 板 . 养 2  培 4h后 直 接 在  S E T R 微生物鉴定仪 中确定菌种 ( CP O 厌氧菌培养时 间均 

延 长至 4    8h)

3 讨论  微生物生长 曲线原理是将一定量 细菌接种于培 

养基中 , 过一定间隔时间取样检查活菌数量 . 通 以发现其生 

长 的规 律 性 ’由 于 需 间 隔 取 样 . 此 得 不 到 连 续 生 长 曲  . 因 线 , 对厌 氧菌 培 养 . 隔取 样 必 导致 其触 氧 时 间 过 长 而生  尤 间 长 困难 , 本蛆 使 用 B cT A E T 10 生 物检 测 系 统 , A / L R  2 微 将  增 菌 瓶 置 于 恒 温震 荡 培 养仪 中 , 据增 菌 瓶 内细 菌 繁 殖 产  根 生 C 的浓度, O: 以

波 长 60n 的 红 光 扫描 瓶 内观 察细 菌  3 m

・ 车 院进 修 医 师 

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陕 西 医 学 检验 第 l 卷 第 l 2 0 5 期 0 0年 2月 

1  5

观 察厌 氧菌生 长 更为 适 用 : 。   通 过 本 组 观察 , 得 生 长 曲 线 仍 分 为 4个 时 期 ( 缓  所 迟

期、 对数生长期、 稳定期及衰退期) 迟缓期多在培养后 2   ~6

h左 右 . 时细 菌 处 于 适 应 阶 段 , 般 不 转 种 i 此 一 艚后 进 ^ 对 

数生长期后 细菌迅速生长. 以恒定速度 分裂繁殖 , 苗数以几  何级数 增长 , 以活苗敷对数为纵轴 的生长 曲线中可见迅  在

速 增长 趋 势 . 而本 组 以哑 光 度 单位 为纵 轴 曲线中 , 细菌 几 乎  里 直 线 方 式 上升 . 组 观 察 该 期 多 集 中于 增 苗 后 6 2   本 ~ 4h

h 

内, 此时尽管多数增菌瓶仍保持较为清亮状态  未见浑 浊,  

但 细 菌分 离 培 养 阳性 率 高 达 9.  (6 /8 ) 而 进 入 稳  5 1 3 736 ; 定期 可 观察 到 多 数 增 苗 瓶 已变 浑 浊 . 组 此 期 细菌 培 养 阳 本   性 率 为 7.  (8 9 ) 若 稳定 期 后 继续 放 置培 养 . 66 7 /8 F 细菌 繁 

图 1 陡 峭型 细 菌 生 长 曲线 

殖减慢死亡数增加 , 即进入衰退期 . 此期 细菌培养阳性率 为  3 .  (8 5 )且培养菌株多为耐受力较强 的大肠杆菌 及  2 7 1 /5 ,

各 种 芽 臆 杆菌 等 。 过 以上观 察 , 议 将 增 苗后 6 4h左  通 建 ~2 

右作为转种的最佳时机, 尽管多数增菌瓶此时仍保持清亮 .  

本 组 由于 多 在 该 时 间 段 内 转 种 . 平 均 分 离 培 养 阳 性 率  其 (25  ) 高 于 一般 报 道 。。 3. 8 远     本 组 59例 增 菌 瓶 阳性 细 菌 生 长 曲线 分 为三 型 : 峭  3 陡

_ … £ H  n

型、 中间 型 、 平缓 型 。陡 峭 型所 占 比例 最 大 ( 86  )分 离  7.7 , 培 养 阳性 率 最 高 (5 2  1该 型 的 特点 是 对 数期 几 乎里 直  9. 8 .

围 2 中 间型细 菌 生 长 曲 线 

线上升. 而稳定期多维持 比较高的水平且时间较长; 中间型 

特 点是 对 数 期缓 慢 上 升里 坡 型改 变 . 稳定 期 较 短  援 型整  平

十培养 曲线呈抛 物线样改变 , 两型不仅所占比例较少 . 后 且 

分 离培 养 阳性 率 均 不 到 2  . 此 认 为 这应 当是 细 菌 分 离  0 因 培 养 失 败 的一 十 重 要 原 因 , 长 曲线 里 中问 型 及平 援 型 的  生 细 菌 为 何 细菌 分 离 培 养 阳性 率 如 此 之 低 , 是 今后 探 讨 的  将

重 点 

参 考 文 献 

陆 德 源 .

医 学 微 生物 学 . 京 ; 民卫 生 出版杜 -97 3 ~3  北 ^ l 9 :1 2

t 目 

Thop   r eTC,W i o   L, r e  E ta  c Alf  l nM s Tu n rJ e  lBa k/ et

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图 3 平缓型细菌生长 曲线  生长情况 . 在数据 系统中反射吸光度单位为纵坐标 , 培养时  间 为 横 坐 标 得 到 其 生 长 曲 线 . 方 法 主要 特 点 是 能够 连 续  该

不 问 断 观察 细 菌 生长 情 况 , 不 干 扰细 苗 正 常 生 长 . 且 尤对 于 

m a e  e l rme rc t d o e i ti mir b a d t c i  s s m   Cl  M i r   c o il e e t on y   c J i n c o. 1 9 2 ( ): 60 ~ l 1   9 0: 8 7 l 8 60

董 庆 元 .败 血 症 患 儿 匿 氧菌 培 养 6 9倒 .中华 医 学 检验 杂 志 . 3  

1 9 2  4 9 8; 1i 0~ 42    

( 稿 :9 8 0— 2 ) 收 19— 9 1 

康宁 64 一 K / i分析仪电磁阀故障排除  4Na /   c

常 虹 姚 亚军  ( 解放 军第 l 2医院 新疆疏勒 840 ) 4 2 0 

美 国 汽 巴 ・ 宁 公 司 生 产 的 64N   K el分 析  康 4  a /  / 一

复冲洗 营 路 . 后 用 蒸 馏 水 冲 洗 . 行 “ 干 da ” 冲癌  然 运 抽 ri “ n

仪. 具有外形精巧 . 测定迅速 , 结果准 确, 重复性好 , 维护 简  便. 经济耐用等特 点  完全适合 中小医院的使用 。   6 4电解 质分 折仪 定标 过程 系统 可 能提 示“ a l 4 S mpe  

F ut ( 暇 样 失 败 )经 多 方 维 护 及 检 测 . 除 其 它 原 因  a l” 即 . 排

pi   r me 程序后定标, 仪器即可正常运行 。但用  4消毒液” 8  

冲 冼 磁 阀 内 部 营 路 时 . 了 防 止 “ 4消 毒 液 ” 经 电 极 , 为 8 疏 造 

成电极损 伤应注意以下两点 : ①进样管道卸掉 ; ②斜标 进样 

管 ( 接 电扳 部 分 ) 去 。 连 卸   2 磁 阀开美 性 能不 理 想 可 在 磁 阀 活 塞 部加 少许 润 滑 油 ,  

( 收穑  9 9 O— 0 ) l 9一 4 2 

后. 发现是由于电磁阀功能障碍引起  导致 电磁阎故障的原 

周 厦 排 除 方 法如 下 :   1 磁 阀 内部 管 道 阻 塞   可用 空 的 定标 {瓶 配 制 一 定 浓 度  瘦

以确 保开 关 性 能 良好 , 器正 常 运 行  机

的‘ 4消毒液”拄  消毒液 ; 8 ( 蒸馏水为 1; 3的 比例 )反  .

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