双缩脲反应_范文大全

双缩脲反应

【范文精选】双缩脲反应

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【专家解析】双缩脲反应

【优秀范文】双缩脲反应

范文一:双缩脲反应 投稿:韦窅窆

双缩脲反应biuret reaction

蛋白质在碱性溶液中与硫酸铜作用形成紫色络合物的呈色反应。在540nm 波长处有最大吸收。可用于蛋白质的定性和定量检测。

紫色络合物分子结构式

在碱性溶液(NaOH)中,双缩脲(H2NOC-NH-CONH2)能与铜离子(Cu2+)作用,形成紫色络合物(该物质的分子结构式见图),该反应即双缩脲反应。 双缩脲反应是肽和蛋白质所特有的,而为氨基酸所没有的一种颜色反应。一般分子中含有两个氨基甲酪基(即肽键:-CO-NH-)的化合物与碱性铜溶液作用,就会形成紫色或蓝紫色络合物。

注:除-CO-NH-有此反应外,(-CONH2-)(-CH2-)、(-NH2-)、(-CS-CS-NH2)、

等基团亦有此反应。

双缩脲反应的鉴定

由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键,因此也能与铜离子在碱性溶液中发生双缩脲反应,且颜色深浅与蛋白质的含量的关系在一定范围内符合比尔定律,而与蛋白质的氨基酸组成及分子量无关,故可用双缩脲法测定蛋白质的含量(借助分光光度计可减小误差)。

双缩脲反应主要涉及肽键,因此受蛋白质特异性影响较小。使用试剂价廉易得,操作简便,可测定的范围为1~10mg蛋白质,适于精度要求不太高的蛋白质含量的测定,能测出的蛋白质含量须在约0.5mg以上。双缩脲法的缺点是精确度低、所需样品量大。干扰此测定的物质包括在性质上是氨基酸或肽的缓冲液,如Tris缓冲液,因为它们产生阳性呈色反应,铜离子也容易被还原,有时出现红色沉淀。

配制双缩脲试剂的注意事项

双缩脲试剂由NaOH溶液(0.1g/mL)和CuSO4溶液(0.01g/mL)配制而成,配制比例为5:1。但是双缩脲试剂不用现配现用,这是与斐林试剂不同的地方之一!

Biuret test

The characteristic color of a positive biuret test

The biuret test is a used for detecting the presence of . In the presence of peptides, a (II) forms a -colored complex in an solution. Several variants on the test have been developed.

The Biuret reaction can be used to assay the of proteins because peptide bonds occur with the same frequency per amino acid in the peptide. The intensity of the color, and hence the absorption at 540 nm, is directly proportional to the protein concentration, according to the .

In spite of its name, the reagent does not in fact contain ((H2N-CO-)2NH). The test is so named because it also gives a positive reaction to the peptide bonds in the biuret molecule.

[] Procedure

An aqueous sample is treated with an equal volume of 1% strong base (sodium or potassium hydroxide most often) followed by a few drops of aqueous . If the solution turns purple, protein is present. 5–160 mg/ml can be

determined.

[] Biuret reagent

The biuret reagent is made of (KOH) and hydrated , together with . The reagent turns from blue to violet , blue to pink when combined with short-chain .

Not all biuret tests require the biuret reagent. The reagent is commonly used in a biuret , a assay used to determine protein —such as at wavelength 540 nm (to detect the Cu2+ ion). Increasing the sensitivity of the biuret test

Cu+ is a strong reducing agent which can react for example with Mo(VI) in to form . In this way, proteins can be detected in concentrations between 0.005 and 2 mg/mL. Molybdenum blue in turn can bind certain organic dyes (, ), resulting in further amplification of the signal.

Cu+ forms a deep purple complex with (BCA), which allows proteins in the range of 0.0005 to 2 mg/mL to be determined. This assay is often referred to as

范文二:尿素能与双缩脲试剂反应吗 投稿:黎鈅鈆

尿素能与双缩脲试剂反应吗

1 题目与答案

1.1 题目

(延边大学出版社2004年5月第1版2004年5月《高中总复习全程教与学生物 丛书主编孙丰

良 主编王锦龙》16页11题)

中央民族大学出版社2003年07月第1版 2003年07月《高中生物·新学案高二生物(上)主编李

子恩孙启茂》16页2题)

由实验可知,在尿素(NH2—CO—NH2)溶液中加入双缩脲试剂,也能呈紫色反应。请依据蛋白质

鉴定实验原理说明其原因。

1.2 答案

蛋白质和尿素中都含有肽键,肽键与双缩脲试剂能发生紫色反应。

2 问题与分析

2.1 问题

原资料认为这是一个知识延伸迁移的试题,蛋白质与双缩脲试剂能发生紫色反应,是因为蛋白

质分子中含有肽键;尿素分子中也含有肽键,所以也能与双缩脲试剂发生紫色反应。

尿素能与双缩脲试剂反应吗?笔者认为本题存在着科学性的错误。

2.2 分析

尿素也叫脲,是碳酸的二酰胺。它的化学结构比较特殊(如下图),是两个(-NH2)连 在一个羧基上。若将尿素加热到稍高于它的熔点时,则发生双分子缩合,两分子尿素脱去一分子氨而生成缩二脲(双缩脲),反应过程如下图。高中教材中生物组织中蛋白质的鉴定就是利用双缩脲反应原理,即缩二脲在碱性溶液中与少量的硫酸铜(CuSO4)溶液作用, 显紫红色的颜色反应。分子中含有两个或两个以上酰胺键(肽键)的化合物如多肽、蛋白质等才能发生这种颜色反应。(汪小兰主编的《有机化学》(第三版)北京:高等教育出版社165)。由于尿素是两个(-NH2)连在一个羧基上,所以尿素

只有一个完整的肽键,不具备两个肽键的基本要求。

另外,我们用国营上海试剂厂(批号59-11-02)的尿素试剂分别配制了0.1g/ml和0.3g/ml的尿素溶液,严格按照实验程序操作操作,发现并没有出现紫红色的颜色反应,出现的是蓝色的絮状物,将实

验结果放置四小时后,出现了蓝色沉淀。

由此看来,教学参考资料及大多数生物教师所说的“尿素能与双缩脲试剂的反应”这种说法是错误的,

是没有科学依据的。

范文三:双缩脲试剂能和二肽反应吗 投稿:汪蘷蘸



6・ 6 

生 堂教堂  堡(  箜

型三   翅

双 缩脲试 剂 能和 二肽 反应 吗 
陈国庆  ( 南 濮 市 龙 高 中 40 ) 河 省 阳 华 区 级 学 50 乔玉晶 ( 龙 省 西 第 中 11 ) 71   黑 江 鸡 市 一 学 50  80
不管是原人教版教材还是不同版本 的新课 程标 准  高中《 生物》 教材中 , 双缩脲试剂都被 用于蛋 白质 的定  1 脲和双缩脲    脲就是尿素 , 双缩脲是将尿素缓慢加热至熔点( 约 

性鉴定或检测 。什么是脲 ?为什 么叫双缩脲?双缩脲 

10~ 6  ̄ 温度过高则 分解 ) , 分子 尿素 问失去  5 10C, 时 两

和双缩脲试剂有何关 系?双缩脲 试剂 能用于二肽的检 
测吗?以下简单介 绍有关知识 。  
n  n 

一分 子氨缩合而成的, 反应式为 :  
正是 因为该物质是 由两分子脲缩合 而成 的 , 名  故
.   n  n 

H— — H + 2 e_ 2— — 2一 N— _ H +N3   c N2 H — — H— —— N 0 H 娶一 2  H  N   N N —  H— — e N +N f — I
H N_  一     +   一  _ NH2   H2 N一   _NH一

双缩脲( 或称二缩脲 、 缩二脲 、 氨基 甲酰脲 、 缩脲 、 氨 亚  氨基二碳酸二酰胺 ) 。双缩脲为无色针状结 晶, 熔点为 
10 , 溶 于 水 。 6℃ 难  

常用的双缩脲试剂 由两种溶液组成 : 质量浓度为 0 1/ .g    m L的 N O a H溶液和质量浓 度为0 0 gm   C S 4 . l/ I的 u O 溶 
液。  

2 双缩脲反应和双缩脲试 剂 

从上述反应原理 可 以看 出 , 双缩脲 反应不 只为双 

双缩脲在碱性溶液 中能与极 稀的硫酸铜溶 液产生  紫红的颜色反应 , 这个 呈色反应 叫做双缩 脲反应 。反 

缩脲所特有 , 凡是分子 中含有两个或两个以上肽键( 一 
C N - ) 一 个 肽 键 和 一 个一C — N 7一C 一  O H- , S H 、 0
NH2 一 CH2 - 、 - NH2、一 CRH~ NH2、 CHNH2 CH2 { 一 ~ Ol 

应式 ( 中, u与 N之间 形成 两个共 价键 , 个配位  其 c 两
键) 如下 :  

或一c 0 c 2 H 等基 团 的物质 以及 乙二 酰乙二胺  H H HN 2
( H C - C N 2 等 物 质都 能 发 生 这种 颜 色 反 应。 N 2O O H )   因此 , 一切蛋 白质或除二肽外 的肽都有双缩脲反应 , 换  言之 , 双缩脲试剂不能和二肽发生反应 , 因为二肽只有 


H   ≤ 等 { 善 l     = H   <

个肽键 ; 同理 , 双缩脲 试剂也 不能与 尿素反 应 , 因为 

尿素的两个一N 2 在同一个 硫
原 子上 , H 连 不具 备两个 
肽键的基本要求 。另外 , 有双缩 脲反应 的物质不 一定  都是蛋 白质或多肽 。N  也干 扰该反应 , H 因为 N  与  H

c   可生成深蓝色 的络离子 [ u N    ¨ 。还应 当 u C ( H )]  
指 出, 该反应用于蛋 白质的定性或定量测定 时, 所产生  的颜色深浅与蛋 白质 的浓 度成正 比 , 而与蛋 白质 的分  子量及所含的氨基酸残基成分无关 。  

作物成熟 、 收获季节 , 也是秋季 作物 的播 种季节 , 人们 
比较忙碌 , 以“ 所 芒种 ” 又可称为“ 忙种”  。 4 为何“ 霜降杀百草 ”  

炼还未完成 , 能力 差 , 抗寒 因此遇低 温突然 袭击 , 植物 
就易受害 , 以农业 生 产上 需提 前 做好 防霜 、 所 防冻 工 
作。  
5 “ 雪 兆 丰年 ” 科 学 依 据 吗  瑞 有

“ 霜降” , 时 由于天气寒 冷 , 开始有 霜出现( 可分 为  “ 早霜” 晚霞 ” 。有霜时往 往伴有 霜冻 , 时 由于  和“ ) 此 气温骤然下降 , 引起 植物 细胞 间及 细胞 内有 水分结  会
冰 , 而导致细胞质过度脱水 , 进 破坏蛋 白质分子和细胞  质凝固变性 。同时 , 可引起生物膜 、 细胞器等结构 的机 

“ 大雪” , 国许 多地 区往往 出现 白雪纷 纷 、 时 我 银 

妆素裹景色 , 时积雪会 像一层厚 厚 的棉 被一样覆 盖  此 在农作物上 , 面起到很好的保暖作用 , 作物避  一方 使农
免受到冻害。另一方面 , 雪化成雪水 时 , 能为作物提供 

械性损 害 , 叶绿体、 粒体功能受阻 , 线 细胞就会死 亡 , 植 
物因此 可能被冻 死。需要指 出的是 , 同植物 的抗寒  不

富含氮营养 的水分 。此 外 , 雪水还 能将土 中 的一些 害  虫及其虫卵冻死 。因此 , 对来年作 物 的生长是极 其  雪 有利 的, 容易获得高产 。如果大雪下 在春天 , 此时作物  的抗寒能力下降 , 易受 到冻害 。 因 此 , 有 “ 雪  极 又 春
讨嫌” 说 。 之  

性能不 同, 且经过抗 寒锻炼 ( 随着气温的逐渐 降低 体内 

发生一 系列适应低温 的生理 生化变化 ) 的植物 其抗寒 
能力会有 一定的增强 , 但在 晚秋时 , 植物 内部 的抗寒锻 


范文四:尿素能与双缩脲试剂反应吗 投稿:姜肺肻

( )促 性 腺 激 素 释 放 激 素  卵 巢  2 ( )通 过 负反 馈 以 维持 激 素 c水 平 的相 对 稳 定  3

( ) 添 加 植 酸 酶 的 饲 料 促 进 鲈 鱼 幼 体 的 生 长 ; 酸 酶 能  4 植

提 高 肠 道 中蛋  的 活 性 , 而对 肠 道 中脂 肪 酶 和 淀 粉 酶 的 活  白酶l

性 影 响较 小 、   ‘   ・   ( ) 肉食 性 , 肠 道 中蛋 白 酶 活性 显 著 高 于脂 肪 酶 和 淀  5 其

粉 酶  .  

( )细胞 膜 上 激 素 a不能通 过具 有选 择透 过性 的细 胞膜  4

()④  5

( )抑 制 6 减少  

’  

  ,

2 .() 使 组 织 中细胞 相 互 分 离开 来  8 1 ( ) 先在 低 倍 镜 下 观 察 , 2 缓慢 移 动 装 片 , 现 理 想 视 野 后  发

换 用 高 倍镜  ( )碱  3

3 .( )W ( × 、 ( ; w   ) W 6) 2 1 W 早)     6) W- ( X W(   ( )非 糯 性 : 性 = : 2 糯 11  

( )WY: = : 3 Wy ll  

( )非 糯 性 黄 胚 乳 : 糯 性 白胚 乳: 性 黄 胚 乳 : 性 白胚  4 非 糯 糯

乳 = ::: 3 131  

( )每 组装 片观 察 多 个视 野  4

( ① 0 1 ② 0 1 ,g仙素溶液诱导 2  , 5 ) 0% .%g 0 4 再在 lh一 清水 中  

培 养 3   6h ()秋 水 仙 素 处理 发 生在 上 一 个 细 胞 周 期 纺 锤 体 形 成 之  6

后  一  _  

非糯 性 黄 胚 乳 : 非糯 性 白 胚 乳 : 性 黄 胚 乳 : 性 白胚 乳 - : 糯 糯 -  9

3: 1 3:    。

( ) 非糯 性 白胚 乳 : 性 白胚 乳 = : 5 糯 81  

3.()①1/ ② 三  3 1 56 1

()( 2  引物 I 引物 Ⅱ 局 部 发 生碱 基 互 补 配对 而 失 效  和

2 .() 高 正 反 馈  9 1  

( ) 生 态塘 和 潜 流 湿地 2

( ) 增加 水 中的 溶氧 量 3

净化作 用  

提 高饵 料 的利 用率 

( 引物 I 自身折 叠后 会 出现 局 部 碱 基 互补 配 对 而 失效    ’

( )D A 聚合 酶 只 能将 单 个 脱 氧 核 苷 酸 连 续 结 合 到 双 链  3 N

D NA 片段 的 引 物链 上  ( ) 见 下 图  4

Mb   oI  

( )后 面 池塘 水体 中 的 N 和 P含 量 ( 4 浓度 ) 来 越 高 越  

( )补 水 和排 水 5 水 泵控 制 水 的 流 量 ( 环 频 次 ) 循  

3 .( )促 进 生根 0 1

()不能 2 4  

抑 制 生 根 

( )① 抑制 ( > X Z Y与 z之 间大小关系不确定  3  x Y, > ,

3  ( )成 体 生长 缓 慢 , 验 效 果 不 明 显  让 鲈 鱼适 应 实 1 1 实   验 养 殖 环境   。  

肘6 0卜’ 

( ) 温 度 不 能过 高 

高 温会 使 植 酸 酶 变性 而 失 去 活 性  2 ()水温、 3 盐度 和 溶 解 氧 等 

o RV 

● , - ' ' ' ● ' ● , l ' ' ' ● ● ● , , , l , , ' , ' ' , , ' , ' ' l , , , ' ' ’ ’ , ' ' ,  , l l ' ' ’ , ' , , ' ’ , ’  ' ’ ' ● ' ' , ' ’ , ' ● , I ● - , , , ● , , , , 'l ' , ' , ' ● 

教 学一 得 

尿 素 能 与 双 缩脲 试 剂 反 应 吗 

中学生物学 2 1 年第二期的 4 01 2页, 朱东跃老师在“ 实验异常设置对实验教学 的甄别作用” 文中, 谈 一 提到 了“ 对刚采集的尿液 

进 行 蛋 白质 检 测 , 尿 液 呈 紫 色 , 明 尿 液 中含 有 蛋 白质— — 这 是 学 生 的观 点 , 教 师 指 出这 一 结 论 不 科 学 , 呈 现 了 关 于尿 素 分  若 说 但 并

子 结构 的示 意 图 。 学 生看 到 尿 素 的 分 子 结 构 时 , 惑 顿 消 ”  当 疑 。 原 资料 认 为 这 是 一 个 知识 延 伸 迁移 的试 题 , 白质 与 双 缩脲 试 剂 能发 生 紫 色反 应 , 因为 蛋 白质 分 子 中含 有 肽 键 , 素 分 子 中 蛋 是 尿   也 含 有 肽 键 。 以也 能与 双 缩 脲 试 剂 发 生 紫 色反 应 。 所  

尿 素 能 与 双 缩脲 试 剂反 应 吗? 笔 者 认 为 本 题 存 在 着科 学性 的错 误 。   尿 素 也 叫 脲 , 碳 酸 的 二 酰 胺 。它 的 化 学 结构 比较 特 殊 ( 1 , 两 个氨 基 (N 2连 在 一 个 羧 基 ( C O 上 。若将 尿 素 加 热 到  是 图 )是 一 H) 一 O H)

稍 高 于 它 的熔 点 时 。 则发 生双 分 子 缩 合 , 两分 子 尿 素 脱 去 一 分 子氨 而生 成 缩 二脲 ( 缩 脲 ) 反 应过 程 如 图 2所 示 。 双 ,  

0 

0 

I   】

H2 — C NH2 N —  

1 0 6  ̄  5 ~1 0 C I II   I  I   H2 — C N  H N— C NH   N — H — — 2 H  一 C— N— C NH2 — 十NH3  

l   l

H I     l I  O  

0  H  O 

缩 二 脲 

图 1  

图2  

高 中教 材 中 生物 组 织 中蛋 白质 的鉴 定就 是 利 用双 缩 脲 反 应 原理 。 缩二 脲 在 碱 性 溶 液 中与 少量 的 硫 酸 铜 (u O ) 液 作 用 , 即 C S .溶 显 

. .

I  

紫红色 颜g . 。 的 a, 分子中 a 含有两个或两个以 上酰胺,  I 肽键) 化合物如多 蛋白 一 一! i 一( 的 肽、 质等才能发生这 种颜色 反应。汪小兰 (  

主编的《 有机化学》第三版) 15页) ( 第 6 。由于尿素是 两个(N 2 一 H) 连在一 个羧基上 , 以尿素只有一个完整的肽键 , 所 不具备

两个肽键 

的基本要求。  

由此看来. 教学参考资料及 大多数 生物教师所说的“ 尿素能与双缩脲试 剂的反应” 这种说 法是错误的 , 是没有科学依据的。  

( 肖红  山 东省 牟 平 第 一 中 学 王 24 0 ) 6 10 

5 ‘— 6 。  。 。 —

范文五:利用双缩脲特性反应快速测定蛋白质 投稿:孔笋笌

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检 测 分 析  质蛋氨酸, 而劣质蛋氨酸 不变色,  

仍 呈 饱 合 硫 酸 铜 溶 液 的浅 蓝 色 。   取 一 支 试 管 ,加 入 蛋 氨 酸 样  品 少 量 , 后 加 入 碘 溶 液 , 蛋 氨  然 若

酸掺人淀粉 , 溶液变为蓝色 , 则 而  优质蛋氨酸无此反应。   取 一 支 直 径 1rm ,长  8 a

硫代硫酸钠标 准溶 液体积 ( E ; m ) 

v  为 滴 定 样 品 时 所 需 硫 代 硫 酸 

量 水蒸汽蒸 馏装 置进行蒸 馏 , 蒸 

出 氨 用 5 mL %硼 酸 溶 液 吸 收 , 0 2  

硫 基 的有 机 物 , 所 以必 须 同 时 采 

用 间 接 碘 量 法 ( 硫 法 ) 凯 氏 定  甲 与 氮 法 来 确 定 蛋 氨 酸 的 含 量 才 是科  

钠 标 准 溶 液 体 积 ( E)C 为 硫 代  m ; 硫 酸 钠 标 准 溶 液 的 浓 度 ( o, o / t l  L)W 为 样 品 重 量 ( ) 7 O为  ; g ;46

用 甲基 红 一溴 基 酚 绿 混 合 溶 液 作 

指 示 剂 , 00 mo/ HC 标 准 溶  用  5 lL 1 液 滴 定 至 暗 红 色 。并 用 同样 方 法  做 空 白试 验 。  

学的 , 用 间接碘量 法( 硫法 ) 仅 甲   或 仅 用 凯 氏 定 氮 法 来 确 定 蛋 氨 酸 

的含量显然是不妥的。   32 比较 两 种 方 法 的 准 确度      不 含 干 扰 杂 质 时 间 接 碘 量 法 

: 2   ; O2 1 C H  ̄ S的 摩 尔 质 量 ( / / N g 

mo)  1。 242 凯 氏 定 氮 法      242 1 原 理 .   蛋 氨 酸 在还 原 性 

按 下式计 算蛋 氨酸含 量 : 蛋 

10 m 的具 塞 试 管 , 入 蛋 氨 酸  5r a 加

样 品 5 mg,然 后 加 入 5 mL水 和 

氨酸 含 量 ( =[ (   V )   %) C V 一   × 19 1 / 4  ]w  2 式 中 V 为 滴定试 样 时所 需   

酸 标 准溶 液 体积 ( mE)v  滴 定  ; 为

空 白 时 所 需 酸 标 准 溶 液 体 积 

( 硫 法 ) 凯 氏 定 氮 法 测 定 结 果  甲 与 均 准 确 、 靠 , 如 果 从 更 加 细 致  可 但 的 角 度来 看 ,凯 氏 定 氮 法 的 澳 定  4

结 果 与标 准 含 量 更 为 接 近 。 在 用  间 接 碘 量 法 时 ,淀 粉指 示 剂 容 易  因保 存 期 较 短 而 失 效 ,碘 液 中 的 

2 mL1 lL OH 溶 液 , 匀 , mo/ Na 摇 再  加 入 03  mL5 m/ %( v) 亚 硝 基 铁  氰 化 钠 溶 液 ( 用 前 配 制 )摇 匀 , 使     于 3 ~ 0C放 置 1mi 再 在 冰 浴  5 4 ̄ 0 n, 中冷 却 2 n,然 后 加 入 2 mi mL13 :  的盐酸 , 匀 , 蛋氨酸呈 红色 , 摇 真  

而 假 冒蛋 氨 酸 不 变 色 ,静 置

数 分 

催 化 剂

(如 CuO K O 或  S , S

NaS  O 或 s e粉 ) 的 帮 助 下 用 浓  硫 酸 进行 消 化 作 用 ,使 蛋 氨 酸 中  的 氮 转 变 成 NH 并 与 H O 化  S 合 成 (   zO  而 非 含 氮 物 质 , NH )S ;  

( E)C 为盐 酸 标 准 溶 液 的 浓 度  m ;

( iL)W 为 试 样 重 量 ( )  mo/ ; g; 192 4  1为 c  _ H^ NO  S的 摩 尔 质 量 

(/ 1。 g mo ) 

则 以 C 2 H 0 t,O T状态  O  T, :   S  

逸 出 。消 化 液 在浓 碱 的 作 用 下 进 

碘 也 有 部 分 会 被 空 气 氧 化 ,从 而 

导 致 消 耗 的 硫 代 硫 酸钠 标 准 溶 液 

钟 , 管底 部 有 沉 淀 , 部 液 体 混  试 上

浊。   24 蛋 氨 酸 含 量 的 测 定   

增 多 , 测 定 值 偏 高 ; 外 , 氨  使 另 蛋

酸 中 的 硫 也 会 不 同程 度 的被 空 气  氧 化 , 而 导 致 消耗 的 碘 液 减少 , 从  

241 阃 接 碘 量 法 (   甲硫 法 )  

24 11 原 理     DL一蛋 氨 酸 及 

使 测 定 值 偏 低 。 此 , 后在 使 用  因 今 间 接 碘 量 法 时 , 在 避 光 、 封 条  应 密 件 下 进 行 。 比较 而 言 , 氏定 氮  相 凯

法 的 测 定 结 果 受 外 界 一 些 理 化 因  素 的 干 扰 较 小 一 些 ,测 定 结 果 的  准确 度 更高 一 些 。  

其 类 似 物 都 有 CH S—CH。    一 一

C -基 团 结 构 ,可 以 与碘 反 应 , H2   被 碘 氧 化 ,与 蛋 氨 酸 反 应 后 剩 余 

的 碘 用 硫 代 硫 酸 钠 标 准 溶 液 滴 

定 ,根 据 消 耗 碘 量 的多 少 可 以得  到 蛋 氨 酸 的 含 量 

33 比较 两 种 方 法 的精 密度   .  间接 碘 量 法 ( 硫 法 ) 凯 氏  甲 与 定 氮法都 是经典 的分析 方法 , 两  种 方 法 重 现性 好 ,有 很 高 的 精 密  行 蒸 馏 , 放 出氨 态 氮 , 硼 酸 溶  释 用

液 吸 收 之 并 与之 结 合 成 为 四硼 酸  铵 ,然 后 以 甲 基 红 一溴 基 酚 绿 混 

2412 方 法 步 骤    

称 取 03    g

( 02 ) 干 燥 的 样 品 , 置 于  000 g 20 i 5n .碘 量 瓶 中 , 入 10 l 加 0 mL水 

3 两 种 方 法 的 比 较 

3 1 比 较 两 种 方 法 的 测 定 结 果    

度 。 就 这 两 种方 法 的 比较 而言 , 单   凯 氏定氮法比间接碘量法 ( 甲硫  法 ) 更高的精密度。 有  

4 结 论  用 化 学 分 析 法 同 时测 甲 硫 基  和 氨 基 来 确 定 蛋 氨 酸 的含 量 的 方  法 简便 、 靠 , 合 定 性 分 析 判 别  可 结 蛋 氨 酸 质量 优 劣 的 方 法 是 完

全 可 

溶 解 , 入 2 磷 酸 二 氢 钾 、g磷  加 g 5 酸 氢 二 钾 、g碘 化 钾 , 充 分 摇 匀  2 溶 解 。 准 确 加 入 5mL  5 lL 0 00 mo/   碘 溶 液 , 盖 紧 瓶 塞 , 避 光 静 置  3 ri 加 入 1 0 n, a mL淀 粉 指 示 剂 , 用  01 lL硫 代 硫 酸 钠 标 准 溶 液    mo/ 滴定 ,溶 液 从 蓝 色 变 成 绿 色 再 至  无 色 为 终 点 ,同 时 做 试 剂 空 白试 

验。  

间接碘量 法( 甲硫 法 ) 凯 氏  与

定氮 法 测 定 蛋 氨 酸 含 量 ,其 结 果  常常 差 别 较 大 。 实上 , 种 方 法  事 两

合 溶 液 作 指 示 剂 , HC1 准 溶  用 标

液 ( 5 lL 滴 定 , 出 氮 的 含  00mo/ ) 求

量 , 而 求 出蛋 氨 酸 的 含 量 。 进   2422 方 法 步 骤       称 取 经  151 0 ̄ 2干燥 4 h后 试 样 05 ( 准   g 称

至 00 0g 放 人 10  0 2 ) 0mL凯 氏 烧  瓶 中 , 加入 7 g硫 酸 钾 、 g硫 酸  05 铜 和 1mL浓 硫 酸 。 在 电 炉 上 慢  5

测 定 结 果 的 忽 高 忽 低 受 到 多 钟 因 

素 的影 响 。 体情 况 分析 如 下 : 具 若  样品里混入…些还原性杂质 ( 如  含硫 的物 质 ) 会 与 加 入 的 碘 液 反  , 应 , 致间接 碘量法 ( 导 甲硫 法 ) 结 

行 的 , 是 科 学 的 。 方 法 也 适 用  也 本

于 羟 基 蛋 氨 酸 、羟 基 蛋 氨 酸 钙 、  

按 下式计 算蛋 氨酸含 量 : 蛋 

果 偏 高 ; 而样 品里 掺 人 一 些 含 氮  化合 物 如 尿 素 、 铵 等 时 , 氏 定  碳 凯

氮法 结 果 将 偏 高 。   蛋 氨 酸 是 既 含 有 氨基 又 含 有 

N一羟 基 蛋 氨 酸 钙 等 类 似 产 品 的 

检测 。  

氨酸 含 量 ( =[ ( 。 V )   %) C V 一   × 7 o/ 4 ]w  6

式 中 v。 滴 定 空 白 时 所 需  为

慢 消 化 至透 明 , 下 冷 却 , 量 转  取 定 入 lO O mL容 量 瓶 ,冷 却 后 定 容 。  

移 取 该 试 液 1  O 0 O mL,装 上 半 微 

( 讯 地 址 :泰 安 市岱 宗 大 街 6  通 1

号  2 1 1 ) 7 08 

剃用双缩脲特性反应快速测定 蛋 白质 

郭东方 彭 秀 红  山 东宝 来 利 来 生 物 工 程 股 份 有 限公 司  饲 料 原 料 掺 假 ,一 般 是 指 有 

目 的 的 、人 为 的 向原 料 中 加 入 一 

情况最 为常见,一些不法商贩为 

了牟 取 暴 利 想 法 设 法 进 行 掺 假 、   造 假 , 且 花 样 翻 新 , 人 防 不 胜  并 令 防 ,掺 假 的重 点 自然 应 该 成 为 检 

验 的重 点 。  

非 有 两 种 , 种 是 添 加 廉 价 、 质  一 劣 有 机 氮 源 ,

比如 鱼 粉 中 添 加 羽 毛  粉 、 革 粉 、 粉 等 ; 一 种 是 添  皮 血 另

氨 基 酸 或 显 微 镜 检 测 等方 法 进 行 

识 别 。 但 现 在 市 场 上 比较 盛 行 一  种 掺 假 方 式 是 添 加 一 些成 分 还 不 

很 清 楚 的化 工 厂 下 脚 料 ,统 称 所 

些 非 固有 成 分 ,增 加 其 重 量 或 某  些 组 分 , 改 变 原 来 外 观 , 降 低  或 以 成 本 , 取 较 高 利 润 。 国 尤 以 蛋  获 我

白原 料 最 为 匮乏 , 格 较 高 , 假  价 掺

加无 机氮源 , 如尿素 、 缩 脲 、 比 双  

硫酸铵等 ,我 们通 常会 采取简易  

显色对 比、 规检测真蛋 白、 常 检测 

谓 “ 白精 ” 如 脲 醛 聚 合 物 。 类  蛋 , 这

物 质 含 氮 量 在 3 % ̄ 0 0 5 之 间 , 国 

目前 蛋 白原 料 掺 假 的途 径 无 

饲稃与养殖 2 0 ・  06 5

设 

维普资讯 http://www.cqvip.com

检测分析 

标 凯 氏 定 氮 法 无 法 分 辨 其 是 否 为 

蛋 白质 氮 ,用 此 法 检 测 它 们 粗 蛋 

碱 性 硫 酸 铜 溶 液 :将 1iL 0u   1 mo/ 氢 氧 化 钾 溶 液 和 2mL 0 lL 0   2%酒 石 酸 钾 钠 溶 液 加 到 90   5 3 mL 蒸 馏 水 中 ,剧 烈 搅 拌 的 同时  陧 

加 入 4mL 4 0   %硫 酸 铜 溶 液 ( 则  否

白竟 高 达 10 3 0 8% ̄ 0 %。 因 为 它 们  形 式 多 样 成 分 又不 确 定 , 简 易 显  色和显微 镜 下识别非 常困难 ; 它  们 又 不 溶 于 水 ,无 法 用 水 把 它们  洗 掉 , 常 规 测 真 蛋 白法 对 其 也 就   无 能 为 力 了 ;用 测 氨 基 酸 可 以鉴  别 ,但 需 用 昂 贵 的 专 用 氨 基 酸 分 

析 仪 ,一 般 饲 料 厂 化 验 室 不 能 实  现 , 且 检 测 时 间 较 长 , 能 会 因  并 可

将生 成氢氧化铜沉淀) 四氯化碳  ;

(u. ; 要 设 备 : 氏 比色 管 、 jo) 主 纳 离 

心机、 光光度计 。 分  

3 操 作 步 骤 

31 样 品制 备   .

本 实 验 所 涉 及 样 品 应 全 部 通  过 6 O目分 析 筛 , 有 少 量 筛 上 物  如 应 用研钵 仔细 磨细后 通过 6 目 O   筛 , 匀备用。 混   32 标 准 曲线 的绘 制  . 以 绝 不 掺 假 的 蛋 白质 原料 为  标 准 蛋 白质 ,先 用 国标 凯 氏定 氮  法 测 其 蛋 白质 含 量 。 分 别 称 取 含  有 如 下 蛋 白 质 的 标 准 蛋 白 质 样 

品  :O、O 6 7 、0、0 10、 4 5 、0、O 8 9 、0  

此 而 延 误 生 产 。 我 们通 过 研 究 应  用 双缩 脲 特 性 反 应 测 原 料 蛋 白质  含 量 ,成 功 区别 出 蛋 白 原 料 中 掺  加 蛋 白精 。该 方 法 简单 、 速 。 快 较  准 确

。 生 产 实 践 中 , 们 应 用 此  在 我 方 法 已多 次 快 速 识 别 出 原 料 中 添  加 蛋 白精 的 现 象 , 并 作 了 妥 善 的  处 理 , 回 了 一定 的 经 济 损 失 。 挽  

1 原理 

量 为横坐标 , 吸光度为纵坐标 . 绘 

制 标 准 曲线 。  

3 3 样 品测 定  .

5 检 查 与 验 证  为 了验证 本方 法的可行 性 ,  

取 一 真 品 玉 米蛋 白 粉 粉 碎 后 全 部 

准 确 称 取 过 6 目筛 的 样 品  0 ( 白 质 含 量 在 4 ~ 1mg之 间 ) 蛋 0 10   于 5mL 比色 管 中 ,加 1 0 mL四 氯  化 碳 ,按 上述 步 骤 显 色 后 , 在  50 m 下测 其 吸 光 度 。 用 测 得 的  6r i

通 过 印 目分 析 筛 , 用 国 标 凯 氏  采 定 氮 法 ,三 人 同时 作 四个 平 行 样  测 其 粗 蛋 白 ,对 分 析 结 果 进行 统  

计 分 析 , 过 F检 验 和 G 检 验 得  通

双 缩脲 与 碱 及 少 量 硫 酸 铜 溶  

10 g于 8支 5 mL 比 色 管 中 , 1r a 0   加 l 四氯 化 碳 , 碱 性 硫 酸 铜  mL 用

溶 液 准 确 稀 释 至 5 mL, 振 摇  0

液作用生成紫红色 配合物 ( 反 此  

应 称 为 双 缩 脲 特 性 反 应 ) 由于 蛋  。

白 质分 子 中含 有 肽 键 ( ~co —  

出 粗 蛋 白 平 均 值 6 .%。 以此 样  29 品 为 标 准 蛋 白质 样 品 ,根 据 方 法  步骤作出标准曲线。   几 种 蛋 白 精 掺 假 试 验 :我 们 

1ri 静 止 3  il 后 再 振 摇  0 n, a 0 ir ll 5 n, 静 止 3 ri 再 次 振 摇  mi 0 n a 5 n, 静 止 3 n n 还 要 振 摇  mi O, A

吸光值在标准 曲线上 即可查得蛋 

白质 含量 。  

4 小 结 

Ni一) 双 缩 脲 结 构 相 似 . 也  t 与 故

能 呈 现 此 反 应 而 生 成 紫 红 色 配 合 

物 ,在 一 定 条 件 下 其 颜 色 深 浅 与 

蛋 白 质 含量 成 正 比 .据 此 可 用 吸  光 度 法来 测 定 蛋 白 质 含量 。  

5 i, m n 使其充分 显色 , 后离心 。 然  

取 离 心 后 的 上 清 液 于 1mm 比色  0 皿 中 , 50 m 波 长 下 以蒸 馏 水  在 6r i

为 空 白测 吸 光 度 。 以蛋 白 质 的 含 

用 查 得 的 蛋 白 质 含 量 与 粗 蛋  白 含 量 进 行 比 较 ,如 果 两 者 非 常  接 近 则 认 为 没 有 掺 假 现 象 ;如 果  相 差 较 大怀 疑 有 掺假 现象 。  

(   %)

找到市 场上常 见的几 种蛋 白精 .  

用凯 氏 定 氮 法 测 得 粗 蛋 白含 量 分  别 为 :#:9 % 、#:8% 、# 1 27 2 10 3   2 4 4 2 6 5 20 5%、 #:1%、 #:2 %。 它 们 

试 剂 及 设 备 

的外 观 不 一 样 ,所 生 产 的 工 艺 也 

表 1 市场 上几 种常见 蛋 白精 掺假 比例实验 

不尽 相 同 , 较 有 代 表 性 。 这 几  比 把 种 蛋 白精 分 别 按 能 提 高 5 、 %   1%、0 0 2 %蛋 白的 比例 加 入 到 准 备 

好 的纯 玉 米 蛋 白粉 中 ,用 凯 氏 定 

氮 法 测 它 们 的 粗蛋 白 ,并 用 本 方  法 测 其 蛋 白含 量 , 果 列于 表 1  结 。 表 1结 果 表 明 ,蛋 白精 掺入   玉 米 蛋 白粉 后 ,能 使 粗 蛋 白 含量  提高 3 %以上 的情 况 , 已完 全 可 以  识别 , 掺假 量 越 大 越 容 易 判 断 。 本  方 法 对 市 场 上 几 种 常 见 蛋 白精 都  能 很好 的 识别 。   在 生 产 实 践 中 , 我 们 应 用 本 

方 法 作 了 大 量 的 试 验 ,进 一 步 验  证 了 方 法 的 有 效 性 ,择 列 一 部 分  检 测 结果 见 表 2  。

以上厂家 曾有两 批测过氨基 

酸 ,氨 基 酸 总 和 与 本 方 法 所 测 蛋 

白质含量 基本接近,进一步说明 

本 方 法 可 以识 别 蛋 白精 。  

诸城 

河南 

寿光 

6    02 6   04 5   63 56 0    5   39 5   58 528 .  5   9 9 6    29

无假 

6 说 明 

掺假 , 氨基酸 总和 2 % 7  

掺假  无 假  无 假 

本 方 法 对 于 原料 中 掺 加 双 缩  脲 的情 况 无 法 识别 , 但 这 种 情 况 

东平瑞 星  东平 

茌平 

可 以通 过 常 规 检 测 真蛋 白 予 以 识  别 ; 同蛋白原料曲线差距较大 , 不  

应做相应曲线。  

基本符合  掺 假 , 基酸 总和 3 %  氨 7

掺 假  无 假 

东平 沙河站  济南  东平淀 粉厂 

( 讯 地 址 : 东 省泰 安 市 高 新 区  通 山

东区 2 10 ) 70 0 

2   镯稃与券磋 2 f   8  ̄ " 5

范文六:双缩脲比色法 投稿:熊綫綬

可溶性蛋白质含量的测定数据表(毛霉)

样品 1

样品 2

样品 3

间 吸光度 1 可溶性蛋 吸光度 2 可溶性蛋 吸光度 3 可溶性蛋 ( A ) 白质含量 ( A ) 白质含量 ( A ) 白质含量 (mg/ml) (mg/ml) (mg/ml)

第1天 第2天 第3天 第4天 第5天 第6天 第7天 第8天 第9天 第 10 天

0.3029 0.3519 0.5006 0.3965 0.4028 0.3993 0.4974 0.541 0.605

6.5173 7.5779

0.3782 0.3812

8.1472 8.2121 7.9394 8.5022 8.5952 8.5455

0.2409 0.3032 0.3725 0.3514 0.3882 0.4008

5.1753 6.5238 8.0238 7.5671 8.3636 8.6364 11.7403 12.818 14.113

10.7965 0.3686 8.5433 8.6797 8.6039 0.3946 0.3989 0.3966

10.7273 0.6487 11.671 0.591

14.0022 0.5442 12.753 14.333 0.594 0.651

13.0563 0.664

空白实验:

可溶性蛋白质含量的测定数据表(米曲霉)

样品 1

样品 2

样品 3

间 吸光度 1 可溶性蛋 吸光度 2 可溶性蛋 吸光度 3 可溶性蛋 ( A ) 白质含量 ( A ) 白质含量 ( A ) 白质含量 (mg/ml) (mg/ml) (mg/ml)

第1天 第2天 第3天 第4天 第5天 第6天 第7天 第8天 第9天 第 10 天

0.3618 0.3421 0.3715 0.3958 0.3824 0.4542 0.5640 0.600 0.621

7.7922 7.3658 7.9874 8.0022 5.9281 9.7922

0.3008 0.3291 0.3411 0.3210 0.4738 0.5174

6.4719 7.0844 7.3441 6.9091 7.3520

0.2776 0.3012 0.3821 0.4233 0.4519

5.9697 6.4805 8.2316 9.1234 9.7424 10.9134 9.6883 12.537 12.753

11.1602 0.5060 10.0823 0.4494 11.823 12.429 0.581 0.591

12.1688 0.4676 12.948 13.403 0.548 0.576

空白实验:

范文七:双缩脲试剂 投稿:侯矍矎

(一)实验原理

双缩脲(NH3CONHCONH3)是两个分子脲经180℃左右加热,放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中,双缩脲与CuSO4形成紫色络合物,称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键,或能过一个中间碳原子相连的肽键,这类化合物都有双缩脲反应。

紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1-10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有:硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。

此法的优点是较快速 ,不同的蛋白质产生颜色的深浅相近,以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速,但并不需要十分精确的蛋白质测定。

(二)试剂与器材

1. 试剂:

(1)标准蛋白质溶液:用标准的结晶牛血清清蛋白(BSA)或标准酪蛋白,配制成10mg/ml的标准蛋白溶液,可用BSA浓度1mg/ml的A280为0.66来校正其纯度。如有需要,标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量,计算出其纯度,再根据其纯度,称量配制成标准蛋白质溶液。牛血清清蛋白用H2O 或0.9%NaCl配制,酪蛋白用0.05N NaOH配制。

(2)双缩脲试剂:称以1.50克硫酸铜(CuSO4&8226;5H2O)和6.0克酒石酸钾钠(KNaC4H4O6&8226;4H2O),用500毫升水溶解,在搅拌下加入300毫升10% NaOH溶液,用水稀释到1升,贮存于塑料瓶中(或内壁涂以石蜡的瓶中)。此试剂可长期保存。若贮存瓶中有黑色沉淀出现,则需要重新配制。

2. 器材:

可见光分光光度计、大试管15支、旋涡混合器等。

(三)操作方法

1. 标准曲线的测定:取12支试管分两组,分别加入0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0毫升的标准蛋白质溶液,用水补足到1毫升,然后加入4毫升双缩脲试剂。充分摇匀后,在室温(20~25℃)下放置30分钟,于540nm处进行比色测定。用未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照液。取两组测定的平均值,以蛋白质的含量为横座标,光吸收值为纵座标绘制标准曲线。

2、样品的测定:取2~3个试管,用上述同样的方法,测定未知样品的蛋白质浓度。注意样品浓度不要超过10mg/ml。

范文八:双缩脲试剂(AB液) 投稿:秦涩涪

北京雷根生物技术有限公司 www.leagene.com

双缩脲试剂(AB液)

简介:

双缩脲是一种用于分析蛋白质的方法,双缩脲反应的原理是在呈蓝色的碱性硫酸铜溶液存在的情况下,铜离子与肽键形成有色螯合的铜复合物,呈紫色。所产生的颜色密度与参与反应肽键数成比例,可通过比色法分析浓度,在紫外可见光谱中的波长为540nm。双缩脲试剂(AB液)由Biuret Reagent A、Biuret Reagent B组成,如组织里含有蛋白质或具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应,颜色深浅与蛋白质浓度成正比。该试剂是较为粗略的验证蛋白质存在的方法,多用于定性检测蛋白质。

组成:

操作步骤(仅供参考):

1、 先将Biuret Reagent A 3ml加入待测样品3ml,振荡均匀,以便产生碱性环境。

2、 加入2~3滴Biuret Reagent B,振荡均匀,如果组织里含有蛋白质或具有两个或两个

以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应,颜色深浅与蛋白质浓度成正比。

3、 如果想采用分光光度计或酶标仪测定,应于540nm波长处的吸光值,如无540nm,

520~562nm之间的波长也可,根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。

注意事项:

1、 待测蛋白和蛋白标准加入双缩脲试剂后,如果发现检测效果不佳,,颜色会随着时间的

延长不断加深。显色反应也会随温度升高而加快。

2、 检测中发现所有孔都呈暗紫色,可能原因是样品含有还原剂,应适当透析或稀释样品。

3、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

范文九:双缩脲试剂配置 投稿:王魸魹

(一) 方法学评价试验 双缩脲试剂配置

摘要

目的:掌握双缩脲法的试剂的配置,并熟悉和掌握分光光度计的使用方法 掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理与操作

方法:标准管法测物质含量的方法、双缩脲法测定蛋白质含量的方法、

双缩脲反应法

结果:成功的配置双缩脲试剂,血清总蛋白的量是38.27g/l.

结论:能够按照正确的方法配置双缩脲试剂,并测定出血清总蛋白量。

英文翻译

Abstract Master configuration Biuret reagent,and Familiar with and master the use of the spectrophotometer。Master the principle and operation of the determination of total proteins by Biuret Method。

Methods Standard tube method to measure the material content,

Double deflation urea method for the determination of protein content and Biuret reaction.

Result configuration of biuret reagent Successfully ,The serum total protein amount of 38.27g/l.

Conclusion We can use the correct way to configured Biuret reagent, and we know determination of serum total protein.

关键词: 双缩脲法 配置 血清总蛋白

前 言

双缩脲是由两分子尿素缩合而成的化合物,在碱性溶液中与硫酸铜反应生成紫红色 络合物,此反应即为双缩脲反应。含有两个或两个以上肽键的化合物都具有双缩脲 反应。蛋白质含有多个肽键,在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色化合物。其颜色深浅与蛋白质的浓度成正比,可以用比色法进行测定,这种紫红色络合物在540nm处有明显吸收峰,吸光度在一定范围内与血清蛋白含量呈正比关系,经与同样处理的蛋白质标准液比较,即可求得蛋白质含量。

1.材料和方法

1.1材料 硫酸铜(CuSO4·5H2O)、酒石酸钾钠(KNaC4H4O6·4H2O)、KI固体 NoOH晶体 标准蛋白质溶液 可见光分光光度计、钥勺、试管、烧杯、 玻璃棒、旋涡混合器

1.2 方法(操作过程)

(1)6mol/L NaOH溶液25ml:用烧杯称取NaOH 6 g,量取蒸馏水25 ml加 入烧杯溶解NaOH,备用。

(2)双缩脲试剂,称取以0.75克硫酸铜(CuSO4·5H2O)溶于新鲜制备的

500ml的蒸馏水,加入2.25克酒石酸钾钠(KNaC4H4O6·4H2O),【用于结合Cu2+,用于防止CuO在碱性条件下沉淀】并加入KI 1.5g【防止碱性酒石酸铜自动还原并防止Cu2O的离析】,等到完全溶解后,在搅拌下加入6g/lNaOH溶液25ml,并

用水定容到250ml,放置塑料瓶中盖紧保存。

(3)取三支试管按下表进行操作

试管号 空白管B 标准管S 测定管T

血清(mL) 0 0 0.06

标准蛋白(mL) 0 0.06 0

蒸馏水(mL) 0.06 0 0

双缩脲试剂(mL) 3 3 3

旋涡混合器摇匀,37℃水浴10分钟,后用分光光度计于540nm波长处比色,以空白管调零点,测得各管吸光度。

2.结果

标准管是0.185,待测管是0.118, 血清总蛋白(g/l)=Au/As x C标准(g/l)=0.118/0.185x60g/l=38.27g/l

3、讨论

3.1 实验结果讨论

3.1.1 我的结果是:S / Abs. T=0.185/0.118=1.568/与参考范围接近,说

明实验误差不是很大本次实验的结果参考范围应该是

Abs. S≈0.140 – 0.160,

Abs. T≈0.090 – 0.110, Abs. S / Abs. T≈ 1.5,

对部分同学结果进行讨论:

3.1.2 同学甲 Abs. S=0.259,Abs. T=0.211,此同学的结果偏大,原来是该同学加样的是误把蛋白质标准溶液加了0.1ml.把双缩脲试剂加5ml,做实验不够认真和细心。

3.1.3 同学乙 Abs. S=0.088,Abs. T=0.061,这个同学的结果偏低,是他加样

的时候,由于加样枪的枪头已经部分老化,封密性不够好,导致加的蛋白质标准溶 液不够0.6ml。以后做实验时候一定要注意实验仪器造成的误差。

3.1.4同学丙 Abs. S=0.113,Abs. T=0.096,是由于此同学在操作加样枪的时候,

按针筒的时候用力过度,导致每一次加样都是超过0.6ml,是操作不规范造成的实验误差。

3.2 实验过程中的讨论

3.2 .1 加试剂时候按不同的顺序会出现不同的溶液颜色的变化。

实验中,加的试剂要先硫酸铜结晶(CuSO4·5H2O)溶于新鲜制备的

蒸馏水,然后加酒石酸钾钠(NaKC4H4O6·4H2O,接着加KI,班上有同学是加

了硫酸铜结晶CuSO4·5H2O)然后加KI,最后才加酒石酸钾钠(NaKC4H4O6·4H2O,结果颜色是咖啡色,变成咖啡带绿色,实验需要重新做,

3.2 .2 加入的氢氧化钠是为了提供碱性环境,向试剂中加入碘化钾,是为了 延长试剂的使用。

3.2 .3 蛋白质定量测量方法除双缩脲法外,还有如下几种测定方法:寿凯氏定氮 法、紫外吸收法、folin-酚试剂法、考马斯亮蓝法。 4.方法学评价

双缩脲(NH3CONHCONH3)是两个分子脲经180℃左右加热,放出一个分子氨后得到的产物,在强碱性溶液中,双缩脲与CuSO4形成紫色络合物,双缩脲反应产生的紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。

优点:双缩脲法测定蛋白质测定范围能够是1~10mg蛋白质,操作简单、快捷。既适合手工操作,又适合自动化分析,重复性好、线性关系好, 双缩脲试剂可以长期保存( 若贮存瓶中有黑色沉淀出现,则需要重新配制)。

缺点:灵敏度差,测定范围窄,样品需要量大,不同的蛋白质产生颜色的深浅相近,因此它常用于需要快速,但并不需要十分精确的蛋白质测定。 干扰测定的物质包括有:在性质上是氨基酸或肽的缓冲液,如TrIs缓冲液,因为它们产生阳性呈色反应,铜离子也容易被还原,有时出现红色沉淀。

5.临床意义: 用双缩脲法测定蛋白质含量,假如血浆蛋白质浓度增高,临床上主要见于因各种原因引起的血浆浓缩;假如血浆蛋白浓度降低,临床上主要见严重肝病、肾病、营养不良、血液稀释等,对有关疾病的早期诊断预后观察具有一定的参考价值。

参考文献

[1] 叶应妩, 王毓三. 全国临床检验操作规程[M] . 第2 版. 南京: 东南大学出

版社,1997: 155~156.

[2] 赵丽丽,等. 不受高脂血症影响的双缩脲试剂[ J].临床检验杂志, 1993;11:4. [3] 刘新光,临床检验生物化学实验指导[M].第一版.高等教育出版社,2006;111-113.

范文十:双缩脲测多肽含量 投稿:顾狊狋

Biuret reaction test peptide content

双缩脲反应

双缩脲反应产生的紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。 双缩脲试剂中真正起作用的是硫酸铜,而氢氧化钾仅仅是为了提供碱性环境,因此它可被其他碱,如氢氧化钠所代替。向试剂中加入碘化钾,可延长试剂的使用寿命。

双缩脲法

(一)实验原理

双缩脲(NH3CONHCONH3)是两个分子脲经180℃左右加热,放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中,双缩脲与CuSO4形成紫色络合物,称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键,或能过一个中间碳原子相连的肽键,这类化合物都有双缩脲反应。

紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1~10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有:硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。

此法的优点是较快速 ,不同的蛋白质产生颜色的深浅相近,以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速,但并不需要十分精确的蛋白质测定。

(二)试剂与器材

1. 试剂:

(1)标准蛋白质溶液:用标准的结晶牛血清清蛋白(BSA)或标准酪蛋白,配制成10mg/ml的标准蛋白溶液,可用BSA浓度1mg/ml的A280为0.66来校正其纯度。如有需要,标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量,计算出其纯度,再根据其纯度,称量配制成标准蛋白质溶液。牛血清清蛋白用H2O 或0.9%NaCl配制,酪蛋白用0.05N NaOH配制。

(2)双缩脲试剂:1.50克硫酸铜(CuSO4·5H2O)和6.0克酒石酸钾钠(KNaC4H4O6·4H2O),用500毫升水溶解,在搅拌下加入300毫升10% NaOH溶液,用水稀释到1升,贮存于塑料瓶中(或内壁涂以石蜡的瓶中)。此试剂可长期保存。若贮存瓶中有黑色沉淀出现,则需要重新配制。参考文献: [发酵鱼粉中寡肽检测技术研究] 【蛋白水解液中多肽含量的测定方法】

2. 器材:

可见光分光光度计、大试管15支、旋涡混合器等。

(三)操作方法

1. 标准曲线的测定:取12支试管分两组,分别加入0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0毫升的标准蛋白质溶液,用水补足到1毫升,然后加入4毫升双缩脲试剂。充分摇匀后,在室温(20~25℃)下放置30分钟,于540nm处进行比色测定。用未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照液。取两组测定的平均值,以蛋白质的含量为横座标,光吸收值为纵座标绘制标准曲线。

2、样品的测定:取2~3个试管,用上述同样的方法,测定未知样品的蛋白质浓度。注意样品浓度不要超过10mg/ml。

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